Kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure
Kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure
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Kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure

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Número de catálogoN.º de reaccionesIncludes
K210003100 preparaciones
K21000225 preparaciones
Número de catálogo K210003
Precio (MXN)
23,089.54
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N.º de reacciones:
100 preparaciones
Precio (MXN)
23,089.54
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El kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure permite aislar una producción elevada de ADN plasmídico de alta pureza de E.coli en menos de 2 horas sin utilizar disolventes orgánicos ni cloruro de cesio y contiene bajos niveles de endotoxinas.
• Rápido: ADN plasmídico purificado de alta calidad en menos de 2 horas
• Eficiente: mayor producción con bajos niveles de endotoxinas

ADN plasmídico de alta pureza
El kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure se ha diseñado para aislar con eficacia el ADN plasmídico de E.coli en un periodo de tiempo de entre 1,5 y 2 horas. El kit emplea resina de intercambio de aniones formada por pequeñas partículas con un tamaño de poro uniforme para purificar el ADN plasmídico con un nivel equivalente al que se obtiene con dos pases por gradientes de CsCl (figura 1). Con el kit se elimina la necesidad de realizar pasos adicionales para extraer contaminantes como el fenol, el cloroformo y el CsCl, lo que minimiza la exposición a materiales peligrosos y su eliminación.

Extracción eficaz de endotoxinas y de alto rendimiento
El kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure permite purificar hasta 30 µg de ADN plasmídico de alta calidad de cultivos nocturnos de E.coli de entre 1 y 3 ml en aproximadamente 1 hora con un nivel de endotoxinas de entre 0,1 y 1 EU/µg al clonar plásmidos de alto número de copias (tabla 1). Por lo general, el ADN aislado mediante el kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ HiPure tiene un A260/A280 > 1,80 cuando las muestras se diluyen en Tris-HCl (pH 7,5), lo que indica que el ADN está razonablemente libre de proteínas que podrían interferir con aplicaciones posteriores.

El ADN aislado se puede utilizar para diversas aplicaciones posteriores:
El ADN purificado es ultrapuro y resulta adecuado para aplicaciones posteriores, como las que requieren ADN de la máxima pureza, como la transfección de células de mamíferos (figura 2), la secuenciación de ADN manual y automatizada, la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la transcripción in vitro, la transformación celular bacteriana, la clonación y el etiquetado.

Para uso exclusivo en investigación. No diseñado para procedimientos de diagnóstico.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Tipo de producto finalADN BAC, ADN plasmídico
Para utilizar con (aplicación)Secuenciación de última generación, transfección, clonación, secuenciación, transformación, etiquetado de ácidos nucleicos, PCR, transcripción in vitro
Compatibilidad de alto rendimientoNo compatible con alto rendimiento (manual)
N.º de reacciones100 preparaciones
Escala preparativa<100 µ g de ADN plasmídico (pequeña escala)
Línea de productosPureLink
Tipo de productoKit MiniPrep de plásmidos
Cantidad100 preparaciones
Tipo de muestraCultivo bacteriano
BásculaMini
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
ObjetivoADN BAC, ADN plasmídico
Tiempo de prueba2 h
FormatoKit
Isolation TechnologyColumna de centrifugación de sílice
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• 50 ml de tampón de resuspensión (R3)
• 550 µl de RNasa A
• 50 ml de tampón de lisis (L7)
• 40 ml de tampón de precipitación (N3)
• 250 ml de tampón de equilibrado (EQ1)
• 500 ml de tampón de lavado (W8)
• 90 ml de tampón de elución (E4)
• 15 ml de tampón TE
• 100 columnas HiPure

Almacenar todos los componentes a temperatura ambiente.

Preguntas frecuentes

I'm getting low/no plasmid DNA after purification using a PureLink HiPure kit, even though there was measurable absorbance. Do you have any suggestions for what I can do?

A common problem encountered with absorbance measurements is turbidity of samples. (This could be caused by residual resin from the column.) If there is insoluble material in the cuvette (not often detected by the naked eye), much of the UV light is not absorbed but scattered, leading to an artificially high UV absorbance reading (at 260 or 280 nm, for example.) If your A260 is high, we recommend that you check the A320 to determine if there is resin in the sample. You can also try to centrifuge or filter (0.2 µm filter) your sample to remove any resin and then recheck the concentration.

I've run out of buffer when using the PureLink HiPure Plasmid Purification Kit (Cat. No. K210018). Can I purchase the buffers separately?

Yes, we would recommend purchasing the PureLink HiPure BAC Buffer Kit (Cat. No. K210018). This kit includes Resuspension Buffer (R3) (250 ml), Lysis Buffer (L7) (250 ml), Precipitation Buffer (N3) (250 ml), and RNase A (20 µg/ml) (5 ml).
You will need to add less RNase A than stated on the bottle label of the R3 buffer in this kit. It says to add 5.6 mL of RNase A. This is the correct amount for the BAC protocol; however, if you are performing standard plasmid isolation, 1.4 mL RNase A should be added.

Plasmid DNA isolated using a PureLink column-based purification kit from an endA+ strain is degraded after a restriction digest. Do you have a suggestion for this?

The HiPure kits should remove all protein from the DNA including endonucleases. For the silica-based PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit, we recommend an extra wash with the optional Wash Buffer W10 to remove endonucleases. This solution is not compatible with the HiPure system and should not be used with those kits. Alternatively, heat the eluted DNA in TE for 10 min at 70 degrees C. This should heat-inactivate any contaminating nucleases.

I'm seeing extra bands present after plasmid purification using your PureLink column-based system. What could cause this to happen?

Extra bands can occur when plasmid DNA is nicked and/or permanently denatured. Plasmid DNA that has been nicked (covalently opened) will run slower than supercoiled DNA during electrophoresis. A small amount of this species of DNA is common and is suitable for downstream applications. Permanently denatured DNA will migrate ahead of the supercoiled DNA and may not be suitable for downstream applications. Do not allow the lysis reaction to proceed longer than 5 minutes.

My purified DNA has particles in it after column-based plasmid purification. Any suggestions?

We have seen this on occasion. The particles do not affect quality of the DNA. Remove the particles by performimg a 1 minute centrifugation at 12,000 x g.

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Citations & References (1)

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Abstract
Role of LRAT on the retinoid isomerase activity and membrane association of Rpe65.
Authors:Jin M, Yuan Q, Li S, Travis GH,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17504753
Absorption of a photon by a vertebrate opsin pigment induces 11-cis to all-trans isomerization of its retinaldehyde chromophore. Restoration of light sensitivity to the bleached opsin requires chemical re-isomerization of the chromophore via an enzyme pathway called the visual cycle. The retinoid isomerase in this pathway is Rpe65, a membrane-associated ... More