Kit de maxipreparación para la filtración de plásmidos PureLink™ HiPure
Kit de maxipreparación para la filtración de plásmidos PureLink™ HiPure
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Kit de maxipreparación para la filtración de plásmidos PureLink™ HiPure

El kit de maxipreparación para la filtración de plásmidos PureLink™ HiPure está diseñado para aislar el ADN plasmídico más puroMás información
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Número de catálogoCantidad
K21001610 preparaciones
K21001725 preparaciones
Número de catálogo K210016
Precio (MXN)
8,033.23
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Cantidad:
10 preparaciones
Precio (MXN)
8,033.23
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El kit de maxipreparación para la filtración de plásmidos PureLink™ HiPure está diseñado para aislar el ADN plasmídico más puro de volúmenes de 100 a 500 ml de bacterias cultivadas durante una noche. Los kits de filtración de plásmidos PureLink™ HiPure incluyen columnas de filtración HiPure, que combinan la filtración para clarificación del lisado bacteriano con la purificación de resina de intercambio de aniones de ADN plásmido en una sola unidad. El ADN plasmídico resultante es de una calidad equivalente a la que se obtiene mediante la purificación con dos pases a través de gradientes de cloruro de cesio, el método de purificación de ADN. Purifique ADN de alta calidad en menos de dos horas para transfecciones y otras aplicaciones sin necesidad de pasos adicionales para extraer contaminantes como ARN, proteínas o endotoxinas. Además, la eliminación de fenol, cloroformo, bromuro de etidio y cloruro de cesio del protocolo minimiza la exposición a materiales peligrosos y su eliminación. Los kits de filtración de plásmidos PureLink™ HiPure proporcionan:

Protocolos simples: aclarado de lisado bacteriano sin centrifugación
Resultados rápidos: ahorre tiempo al purificar ADN plasmídico en menos de dos horas
Gran producción: hasta 200 µg para mesopreparaciones y hasta 850 µg para maxipreparaciones (consulte la tabla)
Rendimiento fiable: el ADN plasmídico de alta calidad purificado con estos kits es adecuado para una amplia variedad de aplicaciones

Funcionamiento
La adición de una columna de filtración HiPure a los kits de plásmidos PureLink™ HiPure proporciona un aclarado rápido del lisado bacteriano sin necesidad de centrifugación (consulte la figura). El cartucho de filtración de lisado se integra en la columna de unión de ADN para crear un paso combinado de clarificación de lisado y de unión de ADN plasmídico directamente a la resina de intercambio de aniones. Un único lavado de columna elimina las impurezas como ARN, proteínas, metabolitos y otras moléculas de bajo peso molecular; a continuación, el ADN plasmídico ultrapuro se eluye con un tampón de alto contenido de sal. A continuación, el ADN se desala y se concentra con un paso de precipitación de isopropanol para ser posteriormente recogido mediante centrifugación. Todo el protocolo se puede completar en unas dos horas.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de columnaColumna de filtro
Volumen de elución15 ml
Tipo de producto finalADN plasmídico
Para utilizar con (aplicación)Secuenciación de última generación, transfección, clonación, secuenciación, transformación, etiquetado de ácidos nucleicos, PCR, transcripción in vitro
Compatibilidad de alto rendimientoNo compatible con alto rendimiento (manual)
N.º de reacciones10 preparaciones
Plásmido<40 kb, plasmídico de copia baja, plasmídico de copia alta, BAC
Escala preparativa> 200 µg de ADN plasmídico (en pequeña escala)
Línea de productosPureLink
Tipo de productoKit de maxipreparación de filtro plasmídico
PurezaGrado de transfección
Cantidad10 preparaciones
Tipo de muestraCultivo bacteriano
BásculaMaxi
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Tipo de sistemaPureLink™
ObjetivoADN plasmídico
Tiempo de prueba90 min
Producción1000 μg
FormatoColumna
Isolation TechnologyResina de intercambio aniónico con filtro de eliminación de lisados
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Los kits de filtración de plásmidos PureLink™ HiPure incluyen tampón de equilibrio (EQ1), tampón de resuspensión (R3), tampón de lisis (L7), tampón de precipitación (N3), RNasa A, tampón de lavado (W8), tampón de elución (E4), tampón TE (TE) y columnas de filtración HiPure. Almacene todos los componentes a temperatura ambiente tras su recepción.

Preguntas frecuentes

I'm getting low/no plasmid DNA after purification using a PureLink HiPure kit, even though there was measurable absorbance. Do you have any suggestions for what I can do?

A common problem encountered with absorbance measurements is turbidity of samples. (This could be caused by residual resin from the column.) If there is insoluble material in the cuvette (not often detected by the naked eye), much of the UV light is not absorbed but scattered, leading to an artificially high UV absorbance reading (at 260 or 280 nm, for example.) If your A260 is high, we recommend that you check the A320 to determine if there is resin in the sample. You can also try to centrifuge or filter (0.2 µm filter) your sample to remove any resin and then recheck the concentration.

I've run out of buffer when using the PureLink HiPure Plasmid Purification Kit (Cat. No. K210018). Can I purchase the buffers separately?

Yes, we would recommend purchasing the PureLink HiPure BAC Buffer Kit (Cat. No. K210018). This kit includes Resuspension Buffer (R3) (250 ml), Lysis Buffer (L7) (250 ml), Precipitation Buffer (N3) (250 ml), and RNase A (20 µg/ml) (5 ml).
You will need to add less RNase A than stated on the bottle label of the R3 buffer in this kit. It says to add 5.6 mL of RNase A. This is the correct amount for the BAC protocol; however, if you are performing standard plasmid isolation, 1.4 mL RNase A should be added.

Plasmid DNA isolated using a PureLink column-based purification kit from an endA+ strain is degraded after a restriction digest. Do you have a suggestion for this?

The HiPure kits should remove all protein from the DNA including endonucleases. For the silica-based PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit, we recommend an extra wash with the optional Wash Buffer W10 to remove endonucleases. This solution is not compatible with the HiPure system and should not be used with those kits. Alternatively, heat the eluted DNA in TE for 10 min at 70 degrees C. This should heat-inactivate any contaminating nucleases.

I'm seeing extra bands present after plasmid purification using your PureLink column-based system. What could cause this to happen?

Extra bands can occur when plasmid DNA is nicked and/or permanently denatured. Plasmid DNA that has been nicked (covalently opened) will run slower than supercoiled DNA during electrophoresis. A small amount of this species of DNA is common and is suitable for downstream applications. Permanently denatured DNA will migrate ahead of the supercoiled DNA and may not be suitable for downstream applications. Do not allow the lysis reaction to proceed longer than 5 minutes.

My purified DNA has particles in it after column-based plasmid purification. Any suggestions?

We have seen this on occasion. The particles do not affect quality of the DNA. Remove the particles by performimg a 1 minute centrifugation at 12,000 x g.