pBAD202 Directional TOPO™ Expression Kit
Product Image
Invitrogen™

pBAD202 Directional TOPO™ Expression Kit

El uso de enzimas de restricción para clonar un gen en un vector de expresión, a menudo obliga a comprometerMás información
Have Questions?
Número de catálogoCantidad
K42020120 reacciones
Número de catálogo K420201
Precio (MXN)
-
Cantidad:
20 reacciones
El uso de enzimas de restricción para clonar un gen en un vector de expresión, a menudo obliga a comprometer la secuencia final del inserto (Figura 1A), sobre todo cuando no hay sitios de restricción útiles cerca de la secuencia de codificación de los genes. Esto puede dar lugar a un espaciado subóptimo de los elementos de expresión o a la incorporación de residuos de aminoácidos no nativos, lo que a su vez reduce los niveles de expresión o causa la producción de proteínas no funcionales.

Además de ser una forma más eficaz de clonar, la clonación TOPO™ elimina estos posibles problemas de expresión. Los vectores de expresión TOPO™ permiten insertar la secuencia de ADN el exacta necesaria simplemente con realizar una PCR con primers diseñados adecuadamente. El producto de PCR se clona con alta eficacia en solo cinco minutos en un vector de expresión activado por la topoisomerasa I. El vector de expresión recombinante resultante contiene una secuencia exacta de ADN sin regiones no codificantes (Figura 1B).

Muchos de los potentes vectores de expresión de Invitrogen están disponibles adaptados para la clonación TOPO™ en un solo paso y la expresión de productos PCR Además, actualmente hay varios vectores de expresión adaptados para la clonación TOPO™ direccional, lo que permite utilizar polimerasas de corrección y clonar los productos de PCR en una orientación específica.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosKanamicina (KanR)
Cepa bacteriana o de levaduraLMG194, TOP10
HendiduraSitio de reconocimiento de EK (enterocinasa)
Sistema constitutivo o inducibleInducible
Mecanismo de expresiónExpresión basada en células
Sistema de expresiónE. coli
Agente inductorArabinosa
Tipo de productoKit de expresión TOPO
Cantidad20 reacciones
Agente de selección (eucariótico)Ninguno
VectorpBAD
Método de clonaciónTOPO direccional
Línea de productosTOPO
PromotoraraBAD
Etiqueta de proteínaEtiqueta His (6x), Etiqueta de epítopo V5, Tiorredoxina
Unit SizeEach

Preguntas frecuentes

How much L-arabinose should I use to induce expression with the pBAD expression system?

While the amount of L-arabinose can vary depending on your expression experiment, we suggest performing a pilot expression experiment with varying amounts of L-arabinose from 0.00002% to 0.2%.

Should I use TOP10 cells or the LMG194 E. coli strain you offer for expression with my pBAD system?

Top10

Advantages:
- Saves time, can go directly from cloning to expression.
- The glycerol stock is more stable because these strains are endA- and recA-.

Disdvantages:
- This strain is not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.

LMG194

Advantages:
- Grows well in minimal media, except M9.
-Have to transform the plasmid into the cells just for expression.
-RM medium with glucose to ensure low basal level of protein.

Disadvantages:
- Not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.
- The glycerol stock may not be stable because this cell strain is not recA- or endA-.

What competent cells do you recommend I use for expression with my pBAD expression system?

We recommend using a competent cell strain that is araBADC- and araEFGH+, allowing transportation of L-arabinose, but not metabolizing it. This is important for expression studies, as the level of L-arabinose will be constant inside the cell and will not decrease over time. We offer our TOP10 competent cells, or our LMG194 E. coli strain.

Can you tell me the sequence of primers that can be used in pBAD vectors to sequence my gene of interest?

The pBAD vectors contain a forward and reverse pBAD primer flanking the gene of interest. The sequences are as follows:

pBAD forward primer: 5'-ATGCCATAGCATTTTTATCC-3'

pBAD reverse primer: 5'-GATTTAATCTGTATCAGG-3'

Do you have a list of the cap colors for the pBAD vectors?

Here are the cap colors:

- pBAD/His A: Red

- pBAD/His B: Orange

- pBAD/His C: Yellow

- pBAD/His LacZ: Green

- pBad/gIII A: Yellow

- pBad/gIII B: Green

- pBad/gIII C: Blue

- pBAD/gIII/calmodulin: Purple