pBAD TOPO™ TA Expression Kit
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pBAD TOPO™ TA Expression Kit

El kit de expresión pBAD TOPO™ TA está diseñado específicamente para la clonación en un solo paso y la expresiónMás información
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Número de catálogoEtiqueta de proteínaCantidad
K430040Etiqueta de epítopo V540 reacciones
K430001Etiqueta His (6x), Etiqueta de epítopo V520 reacciones
Número de catálogo K430040
Precio (MXN)
-
Etiqueta de proteína:
Etiqueta de epítopo V5
Cantidad:
40 reacciones
El kit de expresión pBAD TOPO™ TA está diseñado específicamente para la clonación en un solo paso y la expresión procariótica regulada de productos PCR amplificados con Taq. Una vez que TOPO™ haya clonado su producto de PCR, puede ir directamente a la expresión de proteínas. Algunas de las prácticas características del vector pBAD-TOPO™ incluyen:

• Vector linealizado activado por topoisomerasa I para la clonación de 5 minutos de productos de PCR amplificados con Taq
• Promotor araBAD para una expresión fuertemente regulada en la etiqueta de epítopo E. coli V5 para la detección con un anticuerpo anti-V5
• Etiqueta de polihistidina de terminal C (6xHis) para la purificación con resina quelante de níquel y la detección con un anticuerpo anti-His (terminal C)
• Sitio de escisión de enteroquinasa para la eliminación del péptido líder de terminal N
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosAmpicilina (AMPR)
Cepa bacteriana o de levaduraLMG194, TOP10
HendiduraSitio de reconocimiento de EK (enterocinasa)
Sistema constitutivo o inducibleInducible
Mecanismo de expresiónExpresión basada en células
Sistema de expresiónE. coli
Agente inductorArabinosa
Tipo de productoKit de expresión TA
Cantidad40 reacciones
Agente de selección (eucariótico)Ninguno
VectorpBAD
Método de clonaciónTOPO-TA
Línea de productosTOPO
PromotoraraBAD
Etiqueta de proteínaEtiqueta de epítopo V5
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Cada kit de expresión pBAD TOPO™ TA contiene dos cajas y el medio E. coli LMG194. La caja pBAD TOPO™ TA contiene todos los reactivos necesarios para PCR (excepto polimerasa Taq), entre los que se incluyen 200 ng de vector pBAD-TOPO™ activado por topoisomerasa I, agua estéril, dNTP, tampón 10X para PCR, solución salina, plantilla de control y cebadores, L-arabinosa al 20%, cebadores pBAD para secuenciación o cribado por PCR y un plásmido de control de expresión. Conservar a -20°C. La caja One Shot™ contiene todos los reactivos necesarios para la transformación, incluidas alícuotas de un solo uso de 50 μl de E. coli One Shot™ TOP10 químicamente competente, medio S.O.C. y un plásmido de control superenrollado. Conservar las células One Shot™ a -80 °C. Conservar el medio E. coli LMG194 entre 2 y 8°C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

How much L-arabinose should I use to induce expression with the pBAD expression system?

While the amount of L-arabinose can vary depending on your expression experiment, we suggest performing a pilot expression experiment with varying amounts of L-arabinose from 0.00002% to 0.2%.

Should I use TOP10 cells or the LMG194 E. coli strain you offer for expression with my pBAD system?

Top10

Advantages:
- Saves time, can go directly from cloning to expression.
- The glycerol stock is more stable because these strains are endA- and recA-.

Disdvantages:
- This strain is not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.

LMG194

Advantages:
- Grows well in minimal media, except M9.
-Have to transform the plasmid into the cells just for expression.
-RM medium with glucose to ensure low basal level of protein.

Disadvantages:
- Not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.
- The glycerol stock may not be stable because this cell strain is not recA- or endA-.

What competent cells do you recommend I use for expression with my pBAD expression system?

We recommend using a competent cell strain that is araBADC- and araEFGH+, allowing transportation of L-arabinose, but not metabolizing it. This is important for expression studies, as the level of L-arabinose will be constant inside the cell and will not decrease over time. We offer our TOP10 competent cells, or our LMG194 E. coli strain.

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Citations & References (2)

Citations & References
Abstract
Overexpression, purification, and site-directed spin labeling of the Nramp metal transporter from Mycobacterium leprae.
Authors: Reeve Ian; Hummell David; Nelson Nathan; Voss John;
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:12077319
'It has long been recognized that the pathogenicity of a broad range of intracellular parasites depends on the availability of transition metal ions, especially iron. Nramp1 (natural resistance-associated macrophage protein 1), a proton-coupled divalent metal ion transporter, has been identified as a controlling factor in the resistance or susceptibility to ... More
Ultrafast ligand rebinding in the heme domain of the oxygen sensors FixL and Dos: General regulatory implications for heme-based sensors.
Authors: Liebl Ursula; Bouzhir-Sima Latifa; Negrerie Michel; Martin Jean-Louis; Vos Marten H.;
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:12271121
Heme-based oxygen sensors are part of ligand-specific two-component regulatory systems, which have both a relatively low oxygen affinity and a low oxygen-binding rate. To get insight into the dynamical aspects underlying these features and the ligand specificity of the signal transduction from the heme sensor domain, we used femtosecond spectroscopy ... More