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Invitrogen™

pLenti6.3/V5™-TOPO™ TA Cloning™ Kit

El kit de clonación pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ de Invitrogen™ forma parte de nuestro sistema de expresión lentiviral ViraPower™ HiPerform™ (catálogo K5310-00).El kitMás información
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Número de catálogoCantidad
K531520
también denominado K5315-20
1 Kit
Número de catálogo K531520
también denominado K5315-20
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1 Kit
El kit de clonación pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ de Invitrogen™ forma parte de nuestro sistema de expresión lentiviral ViraPower™ HiPerform™ (catálogo K5310-00).

El kit de clonación pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ -TA contiene el vector de expresión lentiviral adaptado a TOPO™ ViraPower™ HiPerform™ pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ para la clonación rápida basada en PCR y la expresión de alto nivel de un gen objetivo en células de mamíferos con y sin división.El vector pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ está equipado con dos elementos genéticos clave, lo que lo convierte en un vector HiPerform™: el elemento regulador postranscripcional Woodchuck (WPRE) y la secuencia central del tracto Polypurino (cPPT) del gen VIH-1 integrasa produce un aumento de al menos 4 veces en la expresión de proteína en comparación con los vectores que carecen de estos elementos.

Ventajas
• Expresión estable
• Experimentos a largo plazo
• Titulación precisa del virus funcional
• Clonación de PCR TOPO™ altamente eficiente en 5 minutos y en tres sencillos pasos

Características principales
• Elementos HiPerform™ WPRE y cPPT
• Promotor del CMV
• Etiqueta de epítopo V5 en C-terminal
• Selección de blasticina

El kit incluye
• Un vector lacZ como control positivo, pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™
• Células competentes Stbl3™

Para uso exclusivo en investigación.No está previsto para ningún uso terapéutico o de diagnóstico.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de célulaCélula competente
Método de clonaciónTOPO-TA
Sistema constitutivo o inducibleConstitutivo
Tipo de entregaLentiviral
Sistema de expresiónSistemas de expresión lentiviral ViraPower™ HiPerform™
Para utilizar con (aplicación)Expresión de proteínas
de control principalExpresión viral
Línea de productosHiPerform, TOPO, ViraPower
Tipo de productoKit de clonación
PromotorCMV
Etiqueta de proteínaEtiqueta de epítopo V5
Cantidad1 Kit
Agente de selección (eucariótico)Blasticidina
Promotor del marcador de selecciónPromotor de SV40
VectorpLenti, vector TOPO-TA
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Reactivos de clonación TOPO™ TA (caja 1)
pLenti6.3?V5™-TOPO™ (5-10 ng⁄μ l): 20 μ l, -20°C
pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™ Vector de control (0,5 μg⁄μl): 20 μ l, -20°C
10 x tampón de PCR: 100 μ l, -20°C
mezcla de dNTP: 10 μ l, -20°C
solución salina: 50 μ l, -20°C
Primer directo CMV (100 ng⁄μl): 20 μ l, -20°C
V5 (C-terminal) Primer inverso(100 ng⁄μl): 20 μ l, -20°C
Plantilla de PCR de control (50 ng⁄μl): 10 μ l, -20°C
Primers de PCR de control (100 ng⁄μl): 10 μ l, cada uno -20°C
Agua esterilizada: 1 ml

E. Coli químicamente competente One Shot™ Stbl3™ (Caja 2)
Células Stbl3™: 21 x 50 μ l, -80°C
ADN de control pUC19(10 pg⁄μl): 50 μ l, -80°C
SOC Medio: 6 ml, -80°C

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.