DNA pUC18

El vector pUC18 Thermo Scientific es un pequeño plásmido de E. coli con un alto número de copias, de 2686 bp de longitud. Contiene un sitio de clonación múltiple idéntico (MCS) al vector pUC19, excepto que está dispuesto en orientación opuesta.

Aspectos destacados

• Purificado por cromatografía utilizando tecnología patentada
• Más del 90 % en la forma superenrollada
• Aislado de E. coli (dam+, dcm+)
• Para la secuencia de ADN de pUC18, secuencia de ADN de pUC19, análisis de secuencias y creación de mapas consulte la herramienta gratuita en línea REviewer.

Aplicaciones

• Clonación
• Secuenciación de ADN inserto, ADN del pUC18: Preparación de los patrones de peso molecular del ADN

Contenido plasmídico de pUC18/19 y notas de uso - los plásmidos de pUC18/19 contienen:
• El replicón pMB1 rep responsable de la replicación del plásmido (fuente: plásmido pBR322). El alto número de copias de los plásmidos pUC es el resultado de la falta del gen rop y de una única mutación puntual en el replicón rep de pMB1.
• El gen bla, que codifica la beta-lactamasa, confiere resistencia a la ampicilina (fuente: plasmído pBR322). Se diferencia del de pBR322 por dos mutaciones puntuales
• La región del operón E. coli lac que contiene un sitio de unión de la proteína CAP, un promotor P_lac, un sitio de unión del represor lac y la parte terminal 5’ del gen lacZ que codifica el fragmento de la terminación de tipo N de beta-galactosidasa (fuente: M13mp18/19). Este fragmento, cuya síntesis puede ser inducida por IPTG, es capaz de una complementación intra-alélica (alfa) con una forma defectuosa de beta-galactosidasa codificada por el huésped (mutación delta(lacZ)M15). En presencia de IPTG, las bacterias sintetizan ambos fragmentos de la enzima y forman colonias azules en medios con X-Gal. La inserción de ADN en el MCS situado dentro del gen lacZ (los codones 6-7 del lacZ se sustituyen por MCS) desactiva el fragmento de terminación de tipo N de la beta-galactosidasa y elimina la alfacomplementación. Las bacterias portadoras de plásmidos recombinantes, por lo tanto, dan lugar a colonias blancas

. El mapa muestra enzimas que cortan el ADN de pUC18 una vez. Las enzimas producidas por Thermo Scientific se muestran en naranja. Las coordenadas se refieren a la posición del primer nucleótido en cada secuencia de reconocimiento.

Las posiciones exactas de los elementos genéticos se muestran en el mapa (codones de terminación incluidos). El gen bla nucleótidos 2486-2418 (cadena complementaria) codifica para un péptido de señal. El polipéptido LacZ correspondiente a la beta-galactosidasa wt y esencial para el cribaje azul/blanco termina en la posición nt 236 (cadena completa). Otros 30 codones en el mismo marco de lectura se derivan de pBR322. La región rep indicada es suficiente para promover la replicación. La replicación del ADN se inicia en la posición 866 (± 1) y procede en la dirección indicada. Los plásmidos que portan los replicones pMB1 y ColE1 son incompatibles, pero son totalmente compatibles con los que portan el replicón p15A (pACYC177, pACYC184). Los plásmidos derivados de pMB1 pueden amplificarse con cloranfenicol.

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