Reactivo de transfección de células madre Lipofectamine™
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Reactivo de transfección de células madre Lipofectamine™
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El reactivo de transfección Lipofectamine Stem está optimizado para lograr la máxima eficacia con una diferenciación temprana mínima en una amplia gama de células madre. Puede administrar conjuntamente complejos de ADN, ARN y ribonucleoproteína Cas9 (RNP). El reactivo Lipofectamine Stem es compatible con una gran variedad de sistemas de medios, incluyendo el sistema sin alimentación, lo que ayuda a apoyar y a simplificar su flujo de trabajo de cultivos de células madre. Los investigadores pueden lograr una eficacia de la transfección de hasta un 80 % o superior en las células madre pluripotentes (PSC) y en los neurocitoblastos (NSC), y hasta un 45 % en las células madre mesenquimatosas (MSC).
La transfección de células madre sin inhibir la viabilidad celular y el crecimiento celular puede ser todo un desafío debido a la sensibilidad de estas células. Lipofectamine Stem es un reactivo de baja toxicidad que requiere cantidades bajas de ácido nucleico, lo que permite que sus células madre se mantengan saludables y continúen proliferando sin inducir la diferenciación. El reactivo Lipofectamine Stem es:
De un rendimiento superior: una eficacia hasta 3 veces mayor en iPSC, hESC, NSC y MSC en comparación con otros reactivos Versátil: un reactivo para ADN, ARN, proteína Cas9 y la cotransfección Delicado con las células: mantiene la proliferación celular sin inducir la diferenciación Flexible: transfecta las células en adherencia o suspensión, una alternativa a la electroporación
Logro de una edición genética de alta eficacia en las células madre Las aplicaciones de edición genética suelen requerir la capacidad de administrar conjuntamente ADN, ARN o proteínas en las células. El reactivo de transfección Lipofectamine Stem está diseñado para administrar conjuntamente complejos CRISPR/Cas9 en células madre humanas para la edición genética de alta eficiencia. Este reactivo se puede utilizar para la transfección de grandes plásmidos de ADN, como vectores CRISPR/Cas9 todo en uno, y para administrar conjuntamente una gama de ARN, como el gran ARNm Cas9 con complejos de ARNtracr/ARNcr o ARN de guía única (sg), y proteínas como la proteína Cas9 combinada con ARNtracr/ARNcr o ARNsg.
Una alternativa de baja toxicidad a la electroporación La transfección de células madre mediante métodos de electroporación puede ser difícil y laboriosa. Los protocolos de electroporación recomiendan el cultivo en suspensión de células únicas para garantizar la máxima eficacia y la mínima toxicidad. Utilizando el protocolo de transfección inversa, el reactivo de transfección Lipofectamine Stem demuestra ser una alternativa eficaz y menos tóxica a la electroporación para las células madre. Requiere bajas cantidades de ácido nucleico para lograr la máxima eficacia de transfección, a la par con la electroporación, mientras que apoya la proliferación continua sin inducir la diferenciación.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
ClasificaciónLibre de material de origen animal
Para utilizar con (aplicación)Transfección
Línea de productosLipofectamine
Tipo de productoReactivos para transfección
Cantidad0,1 mL
Compatible con sueroNo
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Tipo de célulaCélulas madre
Tipo de muestraCélulas
Transfection TechniqueTransfección basada en lípidos
Unit Size0.1 mL
Contenido y almacenamiento
Almacenar en refrigerador (de 2–8 °C).
Preguntas frecuentes
With Lipofectamine Stem Transfection Reagent, how can I improve the transfection efficiency in my stem cells?
To obtain the highest percent of stem cells transfected with Lipofectamine Stem Transfection Reagent, we highly recommend that you follow cell culture conditions that promote formation of a monolayer versus clumps of cells. If the density of your stem cells is greater than 50% or they are being grown as colonies in other media, more Lipofectamine Stem Transfection Reagent may improve transfection efficiency. For additional details, please refer to the Lipofectamine Stem Transfection Reagent protocol pertinent to your cell type and media on the product page (https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/STEM00008?ICID=search-product), under Documents, Product Literature.
Can I co-transfect plasmid and Cas9 protein (RNP) with Lipofectamine Stem Transfection Reagent?
Yes. Lipofectamine Stem Transfection Reagent can be used to co-deliver multiple payloads, including DNA, mRNA, and Cas9 protein (RNP) into stem cells.
At what density should I plate my stem cells before transfecting them using Lipofectamine Stem Transfection Reagent?
Cell confluency can impact the amount of Lipofectamine Stem Transfection Reagent that is needed for efficient transfection. Stem cells that are near confluency do not transfect well. Plating density should be such that cells are not overgrown 24 hours after transfection. To obtain the highest percent of stem cells transfected, we highly recommend that you dissociate both colony type and monolayer cultures into small clumps of 3-5 cells. If you are growing human pluripotent stem cells in a 24-well plate in Essential 8 Medium on Vitronectin, plate the cells to achieve 30-60% confluency on the day of transfection. For additional details, please refer to the Lipofectamine Stem Transfection Reagent protocol pertinent to your cell type and media on the product page (https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/STEM00008?ICID=search-product), under Documents, Product Literature.
Can I use Lipofectamine Stem Transfection Reagent to transfect neural stem cells (NSCs)?
Yes. Lipofectamine Stem Transfection Reagent can be used to transfect a wide range of stem cell types, while supporting continued proliferation without inducing differentiation. It is our recommended solution for transfecting neural stem cells.
I used Lipofectamine Stem Transfection Reagent. Why are only the outer cells of my stem cell colonies transfected ?
For cells that have aggregated into large colonies, transfection attempts may result in ONLY the outer cells of the colonies being successfully transfected. Transfection in suspension at the time of passaging and re-plating can maximize access of the reagent to all the cells and increase transfection efficiency. We recommend cell culture conditions that promote formation of a monolayer versus clumps of cells. To avoid cell aggregates that form large colonies, gently dissociate colonies to small clumps of 3-5 cells to promote efficient transfection. Follow recommended seeding densities for the cell culture medium and passaging reagents used so that cells are at the recommended starting confluency of 30-60% at the time of transfection and have room to grow for 24-48 hours during transfection.