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Citas y referencias (20)
Invitrogen™
Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry
Detecte apoptosis mediante citometría de flujo con ensayos de caspasa Vybrant FLICA que detectan actividades de policaspasas y caspasas 3/7/8.
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| Número de catálogo | Enzima |
|---|---|
| V35118 | Caspase 3/7 |
| V35117 | Poly Caspases |
| V35119 | Caspase 8 |
Número de catálogo V35118
Precio (MXN)
-
Enzima:
Caspase 3/7
Detecte rápidamente la apoptosis mediada por caspasa mediante citometría de flujo con kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para policaspasas y caspasas 3 y 7. Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM utilizan la metodología de inhibidor fluorescente de caspasas (FLICA) para detectar la actividad de la caspasa e informar sobre ella. Específicamente, estos kits de ensayo de caspasa contienen sustratos FLICA diseñados FAM-VAD-FMOK (para policaspasas), FAM-DEVD-FMOK (para caspasas 3/7) y FAM-LETD-FMOK (para caspasa 8). También incluyen tinciones Hoechst 33342 y de yoduro de propidio, lo que permite la evaluación simultánea de la permeabilidad de la membrana y el ciclo celular mediante citometría de flujo.
Los kits de ensayo de caspasa Vybrant FAM para citometría de flujo emplean un novedoso enfoque para la detección de caspasas activas: los kits aprovechan la metodología FLICA, que es una etiqueta de afinidad. Esta etiqueta de afinidad asocia una fracción de la fluorometilcetona (FMK), que puede reaccionar covalentemente con una cisteína, con una secuencia de aminoácidos específica de la caspasa. Se utilizan diferentes secuencias de reconocimiento de aminoácidos para detectar diferentes caspasas: ácido valina-alanina-aspártico (VAD) para las policaspasas (incluidas las caspasas-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 y -9), ácido aspártico-ácido glutámico-ácido valina-aspártico (DEVD) para caspasa-3/7 y leucina-ácido glutámico-treonina-ácido aspártico (LETD) para caspasa-8. Se incluye un grupo de carboxifluoresceína (FAM) como indicador.
Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.
Se considera que el reactivo FLICA interactúa con el centro de reacción enzimática de una caspasa activada a través de la secuencia de reconocimiento, y luego se acopla covalentemente a través de la fragmentación de la FMK. El inhibidor del FLICA es permeable en células y no citotóxico. Las moléculas FLICA no enlazadas se disipan fuera de la célula y se lavan; la señal fluorescente restante es una medida directa de la cantidad de caspasa activa que estaba presente en el momento en que se agregó el inhibidor. Los picos aproximados de excitación y emisión de los reactivos FLICA, yoduro de propidio y Hoechst 33342 son de 488 nm/⁄530 nm, 535 nm/⁄6617 nm y 350 nm/⁄461 nm, respectivamente. Los reactivos de detección incluidos en los kits de ensayo de policaspasas Vybrant FAM, ensayo de caspasas 3 y 7 y apoptosis de ensayo de caspasa 8 son 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK, 488/⁄530 FAM-DEVD-FMK y 488/⁄530 FAM-LETD-FMK, respectivamente.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Especificaciones
EnzimaCaspase 3/7
Excitación/emisiónFAM-DEVD-FMD: 388/530
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
Líneas láser del citómetro de flujoUV, 488
Para utilizar con (equipo)Citómetro de flujo
Tipo de etiquetaOtras etiquetas o colorantes
Etiqueta o tinteFAM, Hoechst 33342, yoduro de propidio
Línea de productosVybrant
Tipo de productoKit de ensayo de caspasa
Cantidad25 Assays
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Método de detecciónFluorescencia
FormatoTubo
Unit Size25 assays
Contenido y almacenamiento
Un vial de reactivo de caspasa-3 y -7 FAM-DEVD-FMK (reactivo FLICA, sólido liofilizado), un vial de Hoechst 33342 (400 μl, 1 mm en agua), un vial de PI (1 ml, 250 μg/ml en agua), un vial de DMSO (0,5 ml), un frasco de solución fijadora de apoptosis (formaldehído al 10 % con metanol en PBS, 6 ml) y un frasco de tampón de lavado de apoptosis 10x. Almacenar en el refrigerador (2-8 °C) y proteger de la luz.
Preguntas frecuentes
What are the fluorescence excitation/emission maxima for the FAM-DEVD-FMK FLICA reagent, Hoechst 33342, and propidium iodide supplied in the Vybrant FAM Caspase-3 and -7 Assay Kit, for flow cytometry?
Citations & References (20)
Citations & References
Abstract
Monocyte Chemoattractant Protein-Induced Protein 1 (MCPIP1) Enhances Angiogenic and Cardiomyogenic Potential of Murine Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells.
Journal:
PubMed ID:26214508
'The current evidence suggests that beneficial effects of mesenchymal stem cells (MSCs) toward myocardial repair are largely due to paracrine actions of several factors. Although Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1 (MCPIP1) is involved in the regulation of inflammatory response, apoptosis and angiogenesis, whether MCPIP1 plays any role in stem cell-induced
Multiparametric evaluation of apoptosis: effects of standard cytotoxic agents and the cyanoguanidine CHS 828.
Journal:Mol Cancer Ther
PubMed ID:15141009
'A multiparametric high-content screening assay for measurement of apoptosis was developed. HeLa cells and lymphoma U-937 cells were exposed to cytotoxic drugs in flat-bottomed optical microtiter plates. After incubation, the DNA-binding dye Hoechst 33342, fluorescein-tagged probes that covalently bind active caspases and chloromethyl-X-rosamine to detect mitochondrial membrane potential (MMP) were
Flow cytometry-based apoptosis detection.
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19609746
'An apoptosing cell demonstrates multitude of characteristic morphological and biochemical features, which vary depending on the stimuli and the cell type. The gross majority of classical apoptotic hallmarks can be rapidly examined by flow and image cytometry. Cytometry thus became a technology of choice in diverse studies of cellular demise.
BH3-only protein Noxa regulates apoptosis in activated B cells and controls high-affinity antibody formation.
Journal:Blood
PubMed ID:22144184
The efficiency of humoral immune responses depends on the selective outgrowth of B cells and plasma cells that produce high affinity antibodies. The factors responsible for affinity maturation of B cell clones in the germinal center (GC) have been well established but selection mechanisms that allow clones to enter the
In vitro primary human lymphocyte flow cytometry based micronucleus assay: simultaneous assessment of cell proliferation, apoptosis and MN frequency.
Journal:Mutagenesis
PubMed ID:21791709
In order to minimise the number of positive in vitro cytogenetic results which are not confirmed in rodent carcinogenicity tests, biological systems that are p53 and DNA repair proficient should be recommended. Moreover, an appropriate cytotoxicity parameter for top dose selection should be considered. Recent International Conference on Harmonisation draft