pLenti6.2-GW/EmGFP Expression Control Vector

El vector de control de expresión Vivid Colors™ pLenti6.2-GW⁄EmGFP es un vector lentivírico de control positivo ViraPower™ que contiene laMás información

Número de catálogo	Cantidad
V36920 también denominado V369-20	1 unidad

Número de catálogo V36920

también denominado V369-20

Precio (MXN)

Cantidad:

1 unidad

El vector de control de expresión Vivid Colors™ pLenti6.2-GW⁄EmGFP es un vector lentivírico de control positivo ViraPower™ que contiene la proteína fluorescente verde esmeralda (EmGFP). Está diseñado para usarse con los sistemas de expresión lentivírica ViraPower™ como control positivo para permitir la detección de fluorescencia de la EmGFP tras la transfección en células 293FT, como control de titulación para producir un stock de lentivirus que expresa la EmGFP y como control de transducción tras la transducción en células de mamíferos que se dividen y no se dividen. El vector incluye el promotor de CMV para dirigir la expresión constitutiva de la EmGFP y el promotor de PGK para dirigir la expresión persistente a largo plazo del marcador de selección estable de la blasticidina. Este no es un vector de clonación.

Ventajas
• Optimización de la eficacia de la transducción vírica
• Optimización de la transfección de 293FT
• Titulación de 2 días de virus funcional con EmGFP

Características principales
• Promotor inmediato-precoz del citomegalovirus (CMV) humano para controlar la expresión de alto nivel de la EmGFP.
• Promotor de PKG para la expresión del marcador de selección de blasticidina.

El kit incluye
Vector pLenti6.2-GW⁄EmGFP

SKU relacionados
• Línea celular 293FT (R70007; R70007)
• Kit de soporte lentivírico ViraPower™ (K4970-00)
• Mezcla de envase para lentiviral ViraPower™ (K4975-00)
• Lipofectamine™ 2000 (11668-019; 11668-027)

Para uso exclusivo en investigación. No diseñado para uso diagnóstico o terapéutico.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Sistema constitutivo o inducibleConstitutivo

Tipo de entregaLentivírico

Para utilizar con (aplicación)Ensayos con indicadores, expresión viral

Tipo de productoVector de expresión lentiviral

Cantidad1 unidad

Gen marcadorGFP (EmGFP)

Agente de selección (eucariótico)Blasticidina

Promotor del marcador de selecciónPromotor de PGK

VectorpLenti

Método de clonaciónGateway

Línea de productosGateway, ViraPower, Vivid Colors

PromotorCMV

Etiqueta de proteínaSin etiquetar

Unit Size1 each

Contenido y almacenamiento

Vector pLenti6.2-GW⁄EmGFP: 20 μg del vector de control que se suministra en forma de solución de 40 μl de 0.5 μg⁄μl en 10 mM de Tris–HCl, 1 mM de EDTA y con un pH de 8.0. Conservar a –20 °C.

Preguntas frecuentes

I used your pLenti6.2-GW/EmGFP Control Vector and got poor expression of EmGFP after stable transduction into my cell line. What should I do?

This can happen due to excess blasticidin used during selection. Determine the antibiotic sensitivity of your cell line by performing a kill curve. Use the minimum antibiotic concentration required to kill your untransduced cell line.

I used your pLenti6.2-GW/EmGFP Control Vector and got no expression of EmGFP after stable transduction into my cell line. Can you please help?

Promoter silencing or incorrect filter used/detection parameters for flow cytometer are incorrect could lead to no epxression of EmGFP after stable transduction. Screen for multiple antibiotic-resistant clones and select the one with the highest expression levels. Make sure the correct filter is used as well as the FITC detection parameters.

I used your pLenti6.2-GW/EmGFP Control Vector and got poor expression of EmGFP after transient transduction into my cell line. Can you please help?

Poor expression could result from low transduction efficiency, too low of a MOI, or cells harvested too soon after tranduction. Ensure that cells are tranduced in the presence of Polybrene reagent. Check the MOI and/or use a higher MOI, and do not harvest cells until 48-72 hrs post-tranduction.

I used your pLenti6.2-GW/EmGFP Control Vector and got no EmGFP-positive cells after titering. What could have happened?

Here are some possible causes and solutions:

- Incorrect filter or incorrect detection parameters for flow cytommetry; make sure you are using a FITC or Omega XF100 filter set on yoru inverted fluorescence microscope or the FITC detection parameters on your flow cytometer.
- Viral stock stored incorrectly; aliquot and store at -80 degrees C, do not freeze/thaw more than 3 times.
- Polybrene reagent not included during transduction; transduce pLenti6.2-GW/EmGFP into cells in the presence of Polybrene reagent
- Too soon to see EmGFP expression; wait 4 days post-tranduction

How large of a PCR product can I recombine with a pDONR vector via BP cloning? Does the same apply for TOPO-adapted Entry vectors?

There is no theoretical limit to insert size for a BP reaction with a pDONR vector. Maximum size tested in-house is 12 kb. TOPO vectors are more sensitive to insert size and 3-5 kb is the upper limit for decent cloning efficiency.

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