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Contrôles CRISPR |
Contrôles CRISPR positifs et négatifs validés
Les contrôles de haute qualité jouent un rôle essentiel dans le développement réussi des expériences CRISPR-Cas9, ainsi que dans les performances des criblages à haut débit CRISPR-Cas9. Thermo Fisher Scientific offre une collection complète de contrôles positifs et négatifs validés pour optimiser les conditions de livraison, optimiser l’efficacité de la modification et établir des critères de sélection des résultats. Ces contrôles permettront de concevoir des dosages robustes avec un meilleur rapport signal/bruit.
À propos des contrôles CRISPR
| Type de contrôle | Description | Utilisation recommandée | |
|---|---|---|---|
| Contrôles positifs CRISPR | Un contrôle positif CRISPR est nécessaire pour surveiller l’efficacité de la modification génétique des réactifs CRISPR utilisés dans la conception expérimentale. Les contrôles positifs sont des séquences d’ARNg validées qui ont démontré une grande efficacité de modification pour différents types de cellules. Certains contrôles positifs proposés par Thermo Fisher Scientific offrent jusqu’à 90 % d’efficacité de modification ou plus dans plusieurs types de cellules. Des ARNg LentiArray et TrueGuide individuels sont disponibles. | Les contrôles positifs sont destinés à être utilisés pendant le développement des dosages pour déterminer les conditions qui offrent une efficacité maximale de modification dans vos modèles cellulaires. Des ARNg individuels contre des gènes spécifiques sont disponibles pour servir de contrôles biologiques pour le développement de l’essai et comme contrôles positifs sur plaque lors de l’exécution de votre criblage.
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| Contrôles négatifs CRISPR | Un contrôle négatif CRISPR est nécessaire pour montrer que le phénotype observé est le résultat de la modification génétique prévue et n’est pas le résultat d’autres événements non spécifiques. Les contrôles négatifs sont des séquences d’ARNg de contrôle non ciblées qui ne reconnaissent aucune séquence du génome humain. |
Les contrôles négatifs de l’ARNg non ciblés de Thermo Fisher Scientific sont disponibles en plusieurs tailles d’emballage pour une utilisation à la fois dans le développement des dosages et comme contrôles sur plaque lors de l’exécution de tests de criblage.
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| Contrôles d’optimisation de la livraison CRISPR | Les contrôles d’optimisation de la livraison CRISPR sont nécessaires pour s’assurer que la transfection a réussi. Pour les bibliothèques CRISPR LentiArray, Thermo Fisher Scientific propose un ensemble de lentivirus de contrôle disponibles en tant que contrôles négatifs ou positifs, qui expriment la GFP. |
Le marqueur GFP fournit un affichage visuel pour faciliter l’optimisation rapide des conditions de livraison virale.
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Données : Optimisez la conception des dosages avec les contrôles GFP
Dans l’expérience suivante, les cellules HT1080 ont été infectées par le Lentivirus contrôle LentiArray CRISPR, HPRT humain, avec la GFP. Cette technique permet une lecture visuelle de l’efficacité de la transduction et aide à déterminer la multiplicité d’infection (MOI) pour la lignée cellulaire utilisée. Cet exemple illustre comment les contrôles activés par la protéine fluorescente verte (GFP) peuvent être utilisés pour optimiser la transduction et la conception du test.
Figure 1. Cellules HT1080 infectées par le Lentivirus contrôle positif LentiArray CRISPR, HPRT humain et GFP.
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Ressources et manuels d’utilisation pour les contrôles CRISPR
Gene editing resources and support
Resources
Support
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.