L’exonucléase VII est une enzyme simple brin stricte dirigée avec des activités d’exonucléases 5’ → 3’ et 3’ → 5’, ce qui en fait la seule exonucléase bidirectionnelle avec une spécificité à un seul brin. L’exonucléase VII n’a aucune exigence apparente pour les cations divalents, car elle est pleinement active en présence d’EDTA. Les produits de réaction initiale sont des oligonucléotides insolubles dans l’acide qui sont ensuite hydrolysés en forme soluble dans l’acide. Les produits des digestions limitées sont de petits oligomères (des dimères aux dodécamers).

Propriétés :
Poids moléculaire : sous-unité xseA = 51,8 kDa ; sous-unité xseB = 8,8 kDa
Température optimale : 37°C
pH optimal : 8,0
Inactivation : 95°C pendant 10 min.

Pureté :
Supérieure à 95 %, telle que déterminée par SDS-PAGE. Soumise à un test de détection des endonucléases contaminantes, des exonucléases double brin et des ribonucléases.

Tampon de stockage :
Tris-HCl 50 mM (pH 8,0), NaCl 200 mM, EDTA 0,5 mM, DTT 10 mM, glycérol 50 %.

Conditions de dosage :
La réaction (50 µl) contient : Tris-HCl 50 mM (pH 7,9), phosphate de potassium 50 mM (pH 7,6), EDTA 8,3 mM, 2-mercaptoéthanol 10 mM ADN dénaturé et enzyme.

Définition de l’unité :
Une unité correspond à la quantité d’enzyme nécessaire pour catalyser la conversion de 1 nmol de nucléotide en nucléotide soluble dans l’acide en 30 minutes à 37°C dans des conditions de essai standard.

Concentration :
10 unités/µl

Source :
Souche d’E. coli contenant des clones surproducteurs codant les grandes (xseA) et petites (xseB) sous-unités d’exonucléase VII

Protocole : Conditions de réaction typiques (50 µl)
Tris-HCI 70 mM, pH 8,0
EDTA 8 mM
2-mercaptoéthanol 10 mM
ADN 1 µg
50 µg/ml
Unités d’exonucléase VII 0,2

Laisser incuber à 37°C pendant 30 minutes. Inactiver l’enzyme par chauffage à 95°C pendant 10 minutes. Noter que l’exonucléase VII n’est pas inhibée par l’EDTA.

Remarque : Un tampon de dilution typique à utiliser avec l’exonucléase VII est composé de : Tris 50 mM, pH 7,9, DTT 1 mM et BSA acétylée 0,5 mg/ml.

Applications :
  1. Cartographie des positions des introns dans l’ADN génomique.
  2. Élimination de l’ADN vecteur des inserts avec des queues poly (dA-T).
  3. Élimination des amorces pour PCR en excès.
  4. Élimination des saillies simple brin produites par des endonucléases de restriction.