Nucléases Cas9

Dans les expériences de modification génétique CRISPR-Cas9, la nucléase Cas9 se lie à l’ARNg et induit une cassure double brin à une séquence cible génomique spécifique. Pour que l’enzyme Cas9 fonctionne, cette séquence cible doit avoir un site de motif adjacent proto-espaceur (PAM) à proximité de la cassure souhaitée. La nucléase Cas9 est disponible en plusieurs formats pour s’adapter à la conception de votre expérience et à votre flux de travaux privilégié, ce qui permet un clivage précis de l’ADN et un knock-out génétique.
 

Contrairement aux formats de plasmides et d’ARNm, la transfection de notre protéine TrueCut Cas9 complexée avec notre ARNg synthétique TrueGuide contourne la transcription et la traduction, ce qui permet d’augmenter considérablement l’efficacité de modification par l’enzyme Cas9 dans vos expériences. De plus, alors que les plasmides CRISPR restent dans la cellule pendant plus de 72 heures et peuvent exacerber les clivages hors cible, les protéines TrueCut Cas9 sont effacées de la cellule dans les 24 heures, minimisant ainsi les effets hors cible.
 

Figure 1. Comparaison des formats de modification génétique CRISPR-Cas9. La Cas9 et l’ARN guide peuvent être délivrés aux cellules sous forme d’ADN, d’ARN ou de complexes ribonucléoprotéiques préformés (RNP). Lors de l’utilisation d’un vecteur d’ADN plasmidique (en haut à gauche), le gène Cas9 doit d’abord être transcrit dans le noyau, exporté dans le cytoplasme et traduit, tandis qu’un mélange d’ARNm/ARNg (en bas) doit être traduit. Un complexe réactif-protéine (en haut à droite), comme une protéine TrueCut Cas9 couplée à notre ARNg synthétique TrueGuide, contourne ces étapes préliminaires (transcription et traduction) pour une modification génétique plus simple et plus efficace.