Mutationsnachweis mittels digitaler PCR

Flüssigbiopsien finden Anwendung, um genetische Mutationen, die Krebs verursachen, zu identifizieren und zu verfolgen. Forscher können so Krebs frühzeitig erkennen, den Behandlungserfolg bestimmen, die Resttumorbelastung quantifizieren und die aufkommende Resistenz gegen potenzielle Therapien überwachen. Flüssigbiopsien verwenden zellfreie DNA (cfDNA), die aus normalen und Krebszellen gewonnen wird, die Apoptose oder Nekrose durchlaufen haben und ihren DNA-Inhalt in ihre Umgebung freigesetzt haben (1). Die Komponente der cfDNA, die aus Krebszellen freigesetzt wird, wird häufiger als zirkulierende Tumor-DNA oder ctDNA bezeichnet.

Der Nachweis von ctDNA ist für Flüssigbiopsieanwendungen eine Herausforderung, da die Moleküle, die die Krebsmutationen tragen, nur einen Bruchteil der gesamten zirkulierenden cfDNA darstellen, die in der Probe gesammelt wird. Die digitale PCR (dPCR) ist eine etablierte Methode zur schnellen und zuverlässigen Identifizierung genetischer Mutationen. Die genaue Quantifizierung von Einzelnukleotid-Polymorphismen, die bei Wildtyp-Hintergrund-DNA in geringer Häufigkeit auftreten, erfordert einen geeigneten Flüssigbiopsie-Assay mit hervorragender Empfindlichkeit und Spezifität. Applied Biosystems Absolute Q Flüssigbiopsie-dPCR-Assays sind eine präzise, kostengünstige und schnelle Methode zur Überwachung von Behandlungserfolg und Therapieresistenz, indem Tests auf relevante krebsresistente Mutationen durchgeführt werden.

Absolute Q Flüssigbiopsie-dPCR-Assays ermöglichen den reproduzierbaren, spezifischen Nachweis bekannter somatischer Mutationen. Jeder vorkonzipierte Assay wurde mithilfe von Kontrollen validiert, um eine Variantenallelfrequenz von bis zu 0,1 % in für die Krebsforschung relevanten Genen zu erkennen.

Absolute Q Flüssigbiopsie-dPCR-Assays besitzen folgende Eigenschaften:

• Einfachheit: vorformulierter und verifizierter Assay in einem einzigen Röhrchen, sodass Sie sofort mit Ihrer Forschung beginnen können
• Schnelligkeit: minimale Vorbereitungszeit; bei Verwendung mit dem QuantStudio Absolute Q Digital-PCR-System Ergebnis in 90 Minuten
• Hohe Empfindlichkeit: Erkennung einer Variantenallelfrequenz von bis zu 0,1 %
• Robustheit: zuverlässige Analyse Ihrer Daten mit verifizierten Assays, die von einer Leistungsgarantie* unterstützt werden
   

Für DNA/cDNA-Zielstrukturen

Der Absolute Q DNA-Digital-PCR-Mastermix (5X) ist für die Verwendung mit dem QuantStudio Absolute Q Digital-PCR-System optimiert. Der Mix ist als Ein-Röhrchen-Formulierung mit nur einem Schritt für eine schnelle, einfache und reproduzierbare RNA-Quantifizierung konzipiert, die nur minimale vorgelagerte Verarbeitungsschritte erfordert.

Wichtigste Produktmerkmale:

• Schnelle Ergebnisse – etwa fünf Minuten Bearbeitungszeit und Ergebnisse in weniger als zwei Stunden
• Praktische Formulierungmit nur einem Schritt – spart Zeit und Aufwand, indem vorgelagerte cDNA-Konvertierungsschritte eliminiert werden
• Hohe Empfindlichkeit – Erkennung von < 1 Kopie/μl einer bestimmten Zielstruktur innerhalb einer 4-Plex-Reaktion
• Optimiert für Multiplexing – Erkennung von bis zu vier Zielstrukturen in einer einzigen Reaktion
• Hohe Präzision – Erkennung von 20 % Unterschieden in der RNA-Konzentration