Les kits de l’enzyme Dicer BLOCK-iT™ fournissent des groupes de siARN très efficaces pour la dégradation des ARNi. Les groupes de siARN découpés (d-siARN) représentent une approche de bon rapport coût-efficacité pour la réalisation d’expériences multiples avec la même cible. Les expériences avec l’enzyme Dicer fournissent une dégradation robuste et sont particulièrement utiles dans l’évaluation des effets de l’ARNi de plusieurs gènes d’intérêt ou pour le suivi de l’analyse de biopuces. Une fois qu’un effet ARNi est identifié, une évaluation supplémentaire peut impliquer des approches de synthèse ou de vecteurs.

La technologie Dicer peut s’appliquer à une variété de besoins de recherche

  • Inhibition des gènes récalcitrants à la dégradation par d’autres méthodes
  • Étude de gènes multiples tout en évitant les coûts liés à la commande de nombreuses séquences de synthèse
  • Réalisation d’expériences de transfection multiples en parallèle à l’utilisation de la grande quantité de d-siARN générée par chaque réaction
  • La dégradation d’un ARNm cible lors de l’identification d’une cible spécifique a été compliquée
  • Création d’un groupe de d-siARN qui est unique à un gène ou à une famille de gènes afin d’optimiser le potentiel d’une dégradation de puissance exceptionnelle

Forte dégradation avec des groupes de d-siARN générés par l’enzyme Dicer in vitro

Le kit complet d’ARNi de l’enzyme Dicer BLOCK-iT™ vous fournit toute la technologie et les réactifs dont vous avez besoin pour générer un long ARNdb et le couper en groupes de d-siARN. Ce kit comprend tout ce qui est nécessaire pour générer et purifier les groupes de d-siARN et transfecter les cellules de mammifères afin d’obtenir une forte inhibition des gènes (Figure 1).

Figure 1. Les groupes découpés résultent en un ARNi réussi. Des groupes découpés de siARN (d-siARN) ont été créés à partir de transcripts d’ARNdb de β-galactosidase (β-gal) ou de luciférase et sont utilisés pour déterminer la capacité des d-siARN à dégrader exclusivement l’activité des gènes. Les cellules GripTite™ 293 MSR ont été cotransfectées de la manière suivante : plasmides de contrôle positif pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ et pcDNA™5/FRT/luc, exprimant les rapporteurs β-gal luciférase, respectivement ; plasmides de contrôle positif plus 50 ng de d-siARN lacZ ; ou plasmides de contrôle positif plus du d-siARN luc. Pour chaque rapporteur, le d-siARN correspondant a réussi à réduire l’expression de l’activité du rapporteur, tandis que le d-siARN dérivé de l’autre transcript n’a eu
aucune influence sur l’expression.

Préparation simple d’un mélange de d-siARN puissant

Les kits de l’enzyme Dicer d’ARNi BLOCK-iT™ sont les seuls systèmes disponibles qui contiennent l’enzyme Dicer recombinante, un module de purification du d-siARN de haute qualité, ainsi que le réactif de transfection le plus populaire pour l’ARNi, Lipofectamine™ RNAiMAX. Grâce à la technologie de découpage in vitro, l’inhibition ciblée robuste de l’expression génétique est facilement réalisée en générant un groupe de d-siARN en trois étapes simples (Figure 2). Il n’est pas nécessaire de concevoir et de commander des oligos synthétiques. Chaque kit contient tout ce qui est nécessaire pour générer, à partir d’un fragment de PCR d’un gène cible, un groupe très efficace de siARN. De plus grandes dimensions personnalisées de l’enzyme Dicer recombinante d’une pureté exceptionnelle sont également disponibles.


Figure 2. Trois étapes simples pour réussir l’ARNi avec des groupes Dicer.