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Citas y referencias (7)
Thermo Scientific™
LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit
El kit de control y optimización EMSA Thermo Scientific LightShift es un sistema extraordinariamente robusto y sensible para realizar ensayosMás información
| Número de catálogo | Cantidad |
|---|---|
| 20148X | 100 reacciones |
Número de catálogo 20148X
Precio (MXN)
-
Cantidad:
100 reacciones
El kit de control y optimización EMSA Thermo Scientific LightShift es un sistema extraordinariamente robusto y sensible para realizar ensayos de cambio de movilidad electroforética (EMSA) para identificar y caracterizar las interacciones de unión proteína-ADN. El kit incluye reactivos para configurar y personalizar las reacciones de unión del ADN y un conjunto de control de ADN y extracto de proteínas para probar el sistema del kit.
Características del kit de optimización y control EMSA LightShift:
• Excelente para detectar proteínas de baja abundancia en extractos nucleares
• Sensibilidad que supera los métodos radioactivos y de digoxigenina
• Compatible con condiciones de unión establecidas previamente para interacciones ADN-proteína populares
• Incluye el sistema de control de antígenos nucleares de Epstein-Barr (EBNA) para ayudar a los nuevos usuarios a desarrollar un ensayo de trabajo y a comprender los métodos que se utilizan para confirmar la especificidad de la interacción de unión
El principio de la detección de EMSA LightShift es similar a la inmunotransferencia (western blot). El ADN bicatenario etiquetado con extremos de biotina se incuba con un extracto nuclear o factor purificado y se realiza una electroforesis del mismo en gel natural. A continuación, el ADN se transfiere rápidamente (en 30 minutos) a una membrana de nailon positiva, se entrecruza con UV, se le aplica una sonda de conjugado de estreptavidina-HRP y se incuba con el sustrato. El protocolo, desde el etiquetado hasta los resultados, puede realizarse en un solo día.
La interacción de las proteínas con el ADN es fundamental para el control de muchos procesos celulares, incluida la replicación del ADN, su recombinación y reparación, la transcripción y ensamblaje viral. Una técnica que es fundamental para estudiar la regulación de los genes y determinar las interacciones proteína-ADN es el ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA).
La técnica EMSA se basa en la observación de que los complejos proteína-ADN migran más despacio que las moléculas de ADN libre cuando se los somete a una electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida no desnaturalizante. Dado que la tasa de migración del ADN cambia o se retarda tras la unión de proteínas, el ensayo también se denomina de retraso con gel o cambio con gel. Hasta la concepción de EMSA, las interacciones proteína-ADN se estudiaban principalmente mediante ensayos de unión de filtros de nitrocelulosa.
Para realizar el ensayo es necesario un objetivo de ADN purificado con extremo etiquetado con biotina, la prueba del extracto de proteínas, una membrana de nailon y equipos básicos de electroforesis. Los objetivos de ADN se pueden sintetizar con etiquetas 5' o 3' biotina o etiquetarse tras la síntesis con el kit de etiquetado de ADN con extremo de 3' biotina Thermo Scientific (n.° de producto 89818). Los extractos de proteínas nucleares, citosólicas o de células enteras se pueden obtener mediante una amplia variedad de métodos, incluido el kit de reactivos para la extracción citoplasmática y nuclear Thermo Scientific NE-PER (producto n.° 78833).
Más datos del producto
• Geles EMSA de transferencia con el sistema Pierce G2 para efectuar transferencias rápidamente
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LightShift™ Poly (dl-dC)
Características del kit de optimización y control EMSA LightShift:
• Excelente para detectar proteínas de baja abundancia en extractos nucleares
• Sensibilidad que supera los métodos radioactivos y de digoxigenina
• Compatible con condiciones de unión establecidas previamente para interacciones ADN-proteína populares
• Incluye el sistema de control de antígenos nucleares de Epstein-Barr (EBNA) para ayudar a los nuevos usuarios a desarrollar un ensayo de trabajo y a comprender los métodos que se utilizan para confirmar la especificidad de la interacción de unión
El principio de la detección de EMSA LightShift es similar a la inmunotransferencia (western blot). El ADN bicatenario etiquetado con extremos de biotina se incuba con un extracto nuclear o factor purificado y se realiza una electroforesis del mismo en gel natural. A continuación, el ADN se transfiere rápidamente (en 30 minutos) a una membrana de nailon positiva, se entrecruza con UV, se le aplica una sonda de conjugado de estreptavidina-HRP y se incuba con el sustrato. El protocolo, desde el etiquetado hasta los resultados, puede realizarse en un solo día.
La interacción de las proteínas con el ADN es fundamental para el control de muchos procesos celulares, incluida la replicación del ADN, su recombinación y reparación, la transcripción y ensamblaje viral. Una técnica que es fundamental para estudiar la regulación de los genes y determinar las interacciones proteína-ADN es el ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA).
La técnica EMSA se basa en la observación de que los complejos proteína-ADN migran más despacio que las moléculas de ADN libre cuando se los somete a una electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida no desnaturalizante. Dado que la tasa de migración del ADN cambia o se retarda tras la unión de proteínas, el ensayo también se denomina de retraso con gel o cambio con gel. Hasta la concepción de EMSA, las interacciones proteína-ADN se estudiaban principalmente mediante ensayos de unión de filtros de nitrocelulosa.
Para realizar el ensayo es necesario un objetivo de ADN purificado con extremo etiquetado con biotina, la prueba del extracto de proteínas, una membrana de nailon y equipos básicos de electroforesis. Los objetivos de ADN se pueden sintetizar con etiquetas 5' o 3' biotina o etiquetarse tras la síntesis con el kit de etiquetado de ADN con extremo de 3' biotina Thermo Scientific (n.° de producto 89818). Los extractos de proteínas nucleares, citosólicas o de células enteras se pueden obtener mediante una amplia variedad de métodos, incluido el kit de reactivos para la extracción citoplasmática y nuclear Thermo Scientific NE-PER (producto n.° 78833).
Más datos del producto
• Geles EMSA de transferencia con el sistema Pierce G2 para efectuar transferencias rápidamente
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LightShift™ Poly (dl-dC)
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
ensayoEnsayo EMSA
Para utilizar con (equipo)Unidad de adquisición de imágenes myECL™, película de rayos X
IncluyeTampón de unión 10X (1 ml), ADN de control Biotina-EBNA (50 µl), ADN EBNA sin etiquetar (50 µl), extracto de EBNA (125 µl), Poly dI·dC (125 µl), glicerol al 50 % (500 µl), NP-40 al 1 % (500 µl), KCI 1 M (1 ml), MgCl2 de 100 mM (500 µl), EDTA pH 8,0 de 200 mM (500 µl), tampón de carga 5X (1 ml)
Línea de productosLightShift
Tipo de productoKit de control y optimización EMSA LightShift
Cantidad100 reacciones
Especificidad de dianaSin especificidad
TécnicaCambio de gel
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Suficiente para: 100 reacciones de unión
• 1 ml de tampón de unión 10X
• 50 µl de ADN de control Biotina-EBNA
• 50 µl de ADN EBNA sin etiquetar
• 125 µl de extracto de EBNA
• 125 µl Poly (dI·dC)
• 500 µl de glicerol al 50 %
• 500 µl de NP-40 al 1 %
•1 ml de KCI 1 M
• 100 mm de MgCI2, 500 µl
• EDTA pH 8,0 de 200 mm, 500 µl
• 5 tampones de carga, 1 ml
Almacenar a - 20 °C.
• 1 ml de tampón de unión 10X
• 50 µl de ADN de control Biotina-EBNA
• 50 µl de ADN EBNA sin etiquetar
• 125 µl de extracto de EBNA
• 125 µl Poly (dI·dC)
• 500 µl de glicerol al 50 %
• 500 µl de NP-40 al 1 %
•1 ml de KCI 1 M
• 100 mm de MgCI2, 500 µl
• EDTA pH 8,0 de 200 mm, 500 µl
• 5 tampones de carga, 1 ml
Almacenar a - 20 °C.
Preguntas frecuentes
If the LightShift Chemiluminescent EMSA kit has been improperly stored (i.e., at room temperature, -20°C or +4°C), will it still work correctly?
I am using the LightShift Chemiluminescent EMSA kit. Can I probe for the proteins by performing a Western blot?
I am using the LightShift Chemiluminescent EMSA kit. How much protein do I need for each reaction?
What is a "supershift"?
Can the LightShift Chemiluminescent EMSA Kit be used to perform supershifts?
Citations & References (7)
Citations & References
Abstract
Downregulation of ATG14 by EGR1-MIR152 sensitizes ovarian cancer cells to cisplatin-induced apoptosis by inhibiting cyto-protective autophagy.
Journal:
PubMed ID:25650716
'Cisplatin is commonly used in ovarian cancer treatment by inducing apoptosis in cancer cells as a result of lethal DNA damage. However, the intrinsic and acquired resistance to cisplatin in cancer cells remains a big challenge for improving overall survival. The cyto-protective functions of autophagy in cancer cells have been
Tristetraprolin suppresses the EMT through the down-regulation of Twist1 and Snail1 in cancer cells.
Journal:Oncotarget
PubMed ID:26840564
Inhibition of epithelial-mesenchymal transition (EMT)-inducing transcription factors Twist and Snail prevents tumor metastasis but enhances metastatic growth. Here, we report an unexpected role of a tumor suppressor tristetraprolin (TTP) in inhibiting Twist and Snail without enhancing cellular proliferation. TTP bound to the AU-rich element (ARE) within the mRNA 3'UTRs of
Regulation of RIP3 by the transcription factor Sp1 and the epigenetic regulator UHRF1 modulates cancer cell necroptosis.
Journal:Cell Death Dis
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Receptor-interacting kinase-3 (RIP3) is a key regulator of necroptosis. It has been shown that the expression of RIP3 is silenced in most cancer cells and tissues due to genomic methylation. However, the regulatory mechanisms controlling RIP3 expression in cancer cells have not been fully elucidated. Here, we report that Sp1,
Human rickettsial pathogen modulates arthropod organic anion transporting polypeptide and tryptophan pathway for its survival in ticks.
Journal:Sci Rep
PubMed ID:29038575
The black-legged tick Ixodes scapularis transmits the human anaplasmosis agent, Anaplasma phagocytophilum. In this study, we show that A. phagocytophilum specifically up-regulates I. scapularis organic anion transporting polypeptide, isoatp4056 and kynurenine amino transferase (kat), a gene involved in the production of tryptophan metabolite xanthurenic acid (XA), for its survival in
Curcumin Exerted Neuroprotection against Ozone-Induced Oxidative Damage and Decreased NF-
Journal:Oxid Med Cell Longev
PubMed ID:30693069
Ozone is a harmful tropospheric pollutant, causing the formation of reactive oxygen and nitrogen species that lead to oxidative damage in living beings. NF-