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Zitierungen und Referenzen (7)
Thermo Scientific™
LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit
Das Thermo Scientific LightShift EMSA-Optimierungs- und Kontroll-Kit ist ein außerordentlich stabiles und empfindliches System für elektrophoretische Mobilität-Shift-Assays (EMSA) zur IdentifizierungWeitere Informationen
| Katalognummer | Menge |
|---|---|
| 20148X | 100 Reaktionen |
Katalognummer 20148X
Preis (EUR)
246,00
Each
Menge:
100 Reaktionen
Preis (EUR)
246,00
Each
Das Thermo Scientific LightShift EMSA-Optimierungs- und Kontroll-Kit ist ein außerordentlich stabiles und empfindliches System für elektrophoretische Mobilität-Shift-Assays (EMSA) zur Identifizierung und Charakterisierung von Protein-DNA-bindenden Interaktionen. Das Kit enthält Reagenzien zum Einrichten und Anpassen von DNA-Bindungsreaktionen sowie einen Kontrollsatz an DNA- und Proteinextrakt zum Testen des Kit-Systems.
Merkmale des LightShift EMSA-Optimierungs- und Kontroll-Kits:
• Hervorragend geeignet für den Nachweis von Proteinen mit geringem Vorkommen in nuklearen Extrakten
• Empfindlichkeit, die radioaktive und Digoxigenin-Methoden übertrifft
• Kompatibel mit bereits etablierten Bindungsbedingungen für gängige DNA-Protein-Interaktionen
• Beinhaltet das EBNA-Kontrollsystem, das neuen Benutzern bei der Entwicklung eines funktionierenden Assays und dem Verständnis der Methoden hilft, die zur Bestätigung der Bindungsinteraktionsspezifität dient
Das Prinzip für LightShift EMSA-Detektion ähnelt einem Western-Blot. Die mit Biotin endmarkierte Duplex-DNA wird mit einem nuklearen Extrakt oder einem gereinigten Faktor inkubiert und auf einem nativen Gel elektrophoresiert. Die DNA wird anschließend schnell (30 Minuten) zu einer positiven Nylonmembran übertragen, UV-vernetzt, mit Streptavidin-HRP-Konjugat sondiert und mit dem Substrat inkubiert. Das Protokoll von der Markierung bis zu den Ergebnissen kann innerhalb eines Tages fertiggestellt werden.
Die Interaktion von Proteinen mit DNA ist von zentraler Bedeutung für die Kontrolle vieler zellulärer Prozesse, einschließlich DNA-Replikation, Rekombination und Reparatur, Transkription und viraler Assemblierung. Eine Technik, die für die Untersuchung der Genregulation und die Bestimmung von Protein-DNA-Interaktionen von zentraler Bedeutung ist, ist der elektrophoretische Mobilität-Shift-Assay (EMSA).
Die EMSA-Technik basiert auf der Beobachtung, dass Protein-DNA-Komplexe langsamer migrieren als freie DNA-Moleküle, wenn sie nicht denaturierenden Polyacrylamid- oder Agarose-Gelelektrophorese ausgesetzt sind. Da die Geschwindigkeit der DNA-Migration bei Proteinbindung verändert oder verzögert wird, bezeichnet man den Assay auch als Gelshift- oder Gelretardierungsassay. Bis zur Konzeption von EMSA wurden Protein-DNA-Interaktionen hauptsächlich mithilfe Nitrocellulose-Filter-bindende Assays untersucht.
Zur Durchführung des Assays wird nur ein gereinigtes DNA-Ziel benötigt, das mit Biotin, dem zu testenden Proteinextrakt, Nylonmembran und grundlegenden Elektrophoresegeräten endmarkiert wurde. DNA-Ziele können mit 5'- oder 3'-Biotinmarkierungen versehen oder nach der Synthese mit dem Thermo Scientific Biotin 3' End DNA Labeling Kit (Art.-Nr. 89818) markiert werden. Nukleäre, zytosolische oder Gesamtzell-Proteinextrakte können durch verschiedene Methoden gewonnen werden, z. B. mit dem Thermo Scientific NE-PER Reagenzkit für die nukleäre und zytoplasmatische Extraktion (Bestellnr. 78833).
Weitere Produktdaten
• Übertragung von EMSA-Gelen mithilfe des Pierce G2 Fast Blotter
Verwandte Produkte
LightShift™ Chemilumineszenz-EMSA-Kit
LightShift™ Poly (dI-dC)
Merkmale des LightShift EMSA-Optimierungs- und Kontroll-Kits:
• Hervorragend geeignet für den Nachweis von Proteinen mit geringem Vorkommen in nuklearen Extrakten
• Empfindlichkeit, die radioaktive und Digoxigenin-Methoden übertrifft
• Kompatibel mit bereits etablierten Bindungsbedingungen für gängige DNA-Protein-Interaktionen
• Beinhaltet das EBNA-Kontrollsystem, das neuen Benutzern bei der Entwicklung eines funktionierenden Assays und dem Verständnis der Methoden hilft, die zur Bestätigung der Bindungsinteraktionsspezifität dient
Das Prinzip für LightShift EMSA-Detektion ähnelt einem Western-Blot. Die mit Biotin endmarkierte Duplex-DNA wird mit einem nuklearen Extrakt oder einem gereinigten Faktor inkubiert und auf einem nativen Gel elektrophoresiert. Die DNA wird anschließend schnell (30 Minuten) zu einer positiven Nylonmembran übertragen, UV-vernetzt, mit Streptavidin-HRP-Konjugat sondiert und mit dem Substrat inkubiert. Das Protokoll von der Markierung bis zu den Ergebnissen kann innerhalb eines Tages fertiggestellt werden.
Die Interaktion von Proteinen mit DNA ist von zentraler Bedeutung für die Kontrolle vieler zellulärer Prozesse, einschließlich DNA-Replikation, Rekombination und Reparatur, Transkription und viraler Assemblierung. Eine Technik, die für die Untersuchung der Genregulation und die Bestimmung von Protein-DNA-Interaktionen von zentraler Bedeutung ist, ist der elektrophoretische Mobilität-Shift-Assay (EMSA).
Die EMSA-Technik basiert auf der Beobachtung, dass Protein-DNA-Komplexe langsamer migrieren als freie DNA-Moleküle, wenn sie nicht denaturierenden Polyacrylamid- oder Agarose-Gelelektrophorese ausgesetzt sind. Da die Geschwindigkeit der DNA-Migration bei Proteinbindung verändert oder verzögert wird, bezeichnet man den Assay auch als Gelshift- oder Gelretardierungsassay. Bis zur Konzeption von EMSA wurden Protein-DNA-Interaktionen hauptsächlich mithilfe Nitrocellulose-Filter-bindende Assays untersucht.
Zur Durchführung des Assays wird nur ein gereinigtes DNA-Ziel benötigt, das mit Biotin, dem zu testenden Proteinextrakt, Nylonmembran und grundlegenden Elektrophoresegeräten endmarkiert wurde. DNA-Ziele können mit 5'- oder 3'-Biotinmarkierungen versehen oder nach der Synthese mit dem Thermo Scientific Biotin 3' End DNA Labeling Kit (Art.-Nr. 89818) markiert werden. Nukleäre, zytosolische oder Gesamtzell-Proteinextrakte können durch verschiedene Methoden gewonnen werden, z. B. mit dem Thermo Scientific NE-PER Reagenzkit für die nukleäre und zytoplasmatische Extraktion (Bestellnr. 78833).
Weitere Produktdaten
• Übertragung von EMSA-Gelen mithilfe des Pierce G2 Fast Blotter
Verwandte Produkte
LightShift™ Chemilumineszenz-EMSA-Kit
LightShift™ Poly (dI-dC)
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
AssayEMSA-Assay
Zur Verwendung mit (Geräte)myECL™ Imager, Röntgenfilm
Enthält10-fach Bindungspuffer (1 ml), Biotin-EBNA Kontroll-DNA (50 µl), nicht markierte EBNA-DNA (50 µl), EBNA-Extrakt (125 µl), Poly dI·dC (125 µl), 50%iges Glycerol (500 µl), 1%iges NP-40 (500 µl), 1M KCl (1 ml), 100 mM MgCl2 (500 µl), 200 mM EDTA pH 8,0 (500 µl), 5-fach Ladepuffer (1 ml)
ProduktlinieLightShift
ProdukttypLightShift EMSA Optimierungs- und Kontroll-Kit
Menge100 Reaktionen
ZielspezifitätNicht zielspezifisch
VerfahrenGelverschiebung
FormatKit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Ausreichend für: 100 Bindungsreaktionen
• 10 X Bindungspuffer, 1 ml
• Biotin-EBNA Kontroll-DNA, 50 µl
• Nicht markierte EBNA-DNA, 50 µl
• EBNA-Extrakt, 125 µl
• Poly (dI·dC), 125 µl
• 50 % Glycerol, 500 µl
• 1 % NP-40, 500 µl
• 1 M KCl, 1 ml
• 100 mM MgCl2, 500 µl
• 200 mM EDTA pH 8,0, 500 µl
• 5 X Ladepuffer, 1 ml
Lagerung bei -20 °C.
• 10 X Bindungspuffer, 1 ml
• Biotin-EBNA Kontroll-DNA, 50 µl
• Nicht markierte EBNA-DNA, 50 µl
• EBNA-Extrakt, 125 µl
• Poly (dI·dC), 125 µl
• 50 % Glycerol, 500 µl
• 1 % NP-40, 500 µl
• 1 M KCl, 1 ml
• 100 mM MgCl2, 500 µl
• 200 mM EDTA pH 8,0, 500 µl
• 5 X Ladepuffer, 1 ml
Lagerung bei -20 °C.
Häufig gestellte Fragen (FAQ)
If the LightShift Chemiluminescent EMSA kit has been improperly stored (i.e., at room temperature, -20°C or +4°C), will it still work correctly?
I am using the LightShift Chemiluminescent EMSA kit. Can I probe for the proteins by performing a Western blot?
I am using the LightShift Chemiluminescent EMSA kit. How much protein do I need for each reaction?
What is a "supershift"?
Can the LightShift Chemiluminescent EMSA Kit be used to perform supershifts?
Zitierungen und Referenzen (7)
Zitierungen und Referenzen
Abstract
Downregulation of ATG14 by EGR1-MIR152 sensitizes ovarian cancer cells to cisplatin-induced apoptosis by inhibiting cyto-protective autophagy.
Journal:
PubMed ID:25650716
'Cisplatin is commonly used in ovarian cancer treatment by inducing apoptosis in cancer cells as a result of lethal DNA damage. However, the intrinsic and acquired resistance to cisplatin in cancer cells remains a big challenge for improving overall survival. The cyto-protective functions of autophagy in cancer cells have been
Tristetraprolin suppresses the EMT through the down-regulation of Twist1 and Snail1 in cancer cells.
Journal:Oncotarget
PubMed ID:26840564
Inhibition of epithelial-mesenchymal transition (EMT)-inducing transcription factors Twist and Snail prevents tumor metastasis but enhances metastatic growth. Here, we report an unexpected role of a tumor suppressor tristetraprolin (TTP) in inhibiting Twist and Snail without enhancing cellular proliferation. TTP bound to the AU-rich element (ARE) within the mRNA 3'UTRs of
Regulation of RIP3 by the transcription factor Sp1 and the epigenetic regulator UHRF1 modulates cancer cell necroptosis.
Journal:Cell Death Dis
PubMed ID:28981102
Receptor-interacting kinase-3 (RIP3) is a key regulator of necroptosis. It has been shown that the expression of RIP3 is silenced in most cancer cells and tissues due to genomic methylation. However, the regulatory mechanisms controlling RIP3 expression in cancer cells have not been fully elucidated. Here, we report that Sp1,
Human rickettsial pathogen modulates arthropod organic anion transporting polypeptide and tryptophan pathway for its survival in ticks.
Journal:Sci Rep
PubMed ID:29038575
The black-legged tick Ixodes scapularis transmits the human anaplasmosis agent, Anaplasma phagocytophilum. In this study, we show that A. phagocytophilum specifically up-regulates I. scapularis organic anion transporting polypeptide, isoatp4056 and kynurenine amino transferase (kat), a gene involved in the production of tryptophan metabolite xanthurenic acid (XA), for its survival in
Curcumin Exerted Neuroprotection against Ozone-Induced Oxidative Damage and Decreased NF-
Journal:Oxid Med Cell Longev
PubMed ID:30693069
Ozone is a harmful tropospheric pollutant, causing the formation of reactive oxygen and nitrogen species that lead to oxidative damage in living beings. NF-