EZ-Link™ HPDP-Biotin, No-Weigh™ Format

Thermo Scientific EZ-Link HPDP-Biotin ist ein membrangängiges Biotin-Markierungsreagenz, das mit Sulfhydryl-Gruppen (-SH) reagiert. Die resultierende Disulfid-Bindung zwischen dem Sulfhydryl-Zielmolekül und der Biotin-Gruppe kann durch Reduktionsmittel aufgespalten werden, um die Biotin-Gruppe zu lösen und das Protein (oder Peptid) in seiner ursprünglichen, nicht modifizierten Form zu regenerieren. Die Markierung mit HPDP-Biotin ist praktisch, wenn immobilisiertes Avidin, Streptavidin oder Thermo Scientific NeutrAvidin Protein zur Aufreinigung der Zielmoleküle zur Reduzierung für SDS-PAGE oder Massenanalyse verwendet wird. Die erfassten biotinylierten Moleküle können effizient vom Träger eluiert werden, indem die Disulfid-Bindung mit Dithiothreitol (DTT) oder einem anderen Reduktionsmittel gespalten wird, anstatt die hohe Affinitätswechselwirkung zwischen Avidin und Biotin mit starker Säure oder einem Denaturierungsmittel zu dissozieren.

Thermo Scientific No-Weigh Produkte sind Spezialreagenzien, die in einem voraliquotierten Format geliefert werden. Die vorgewogene Verpackung trägt dazu bei, den Verlust der Reagenzreaktivität und eine Kontamination im Laufe der Zeit zu verhindern, indem wiederholtes Öffnen und Schließen des Fläschchens eliminiert werden. Das Format ermöglicht die Verwendung frischer Reagenzfläschchen bei jedem Einsatz, wodurch das mühsame Abwiegen kleiner Reagenzienmengen vermieden und Bedenken hinsichtlich der Reagenzienstabilität reduziert werden.

Merkmale von EZ-Link HPDP-Biotin:

• Proteinmarkierung — Biotinylierte Antikörper oder andere Proteine zum Einsatz in Proteinmethoden
• Thiol-reaktiv — Reagiert mit Sulfhydrylen (-SH), z. B. der Seitenkette von Cystein (C)
• Pyridyldithiol-aktiviert — Durchführen von Reaktionen bei pH 6,5 bis 7,5 in Puffern wie PBS
• Reversibel — Bildung von Disulfid-Bindungen, die mit DTT oder anderen Reduktionsmitteln aufgespalten werden können
• Löslichkeit — Muss vor der weiteren Verdünnung in wässrigen Puffern in DMSO oder DMF gelöst werden
• Mittlere Länge — Die Länge des Spacerarms (die dem Ziel hinzugefügte Gesamtlänge) beträgt 29,2 Angström

HPDP-Biotin ist eine Pyridyldithiol-Biotin-Verbindung zur Markierung von Protein-Cysteinen und anderen Molekülen, die Sulfhydryl-Gruppen enthalten. Dieses Reagenz reagiert spezifisch mit reduzierten Thiolen (-SH) in nahezu neutralen Puffern, um reversible Disulfid-Bindungen zu bilden. HPDP-Biotin eignet sich für Markierungs- und Affinitätsreinigungsanwendungen, die die Rückgewinnung des ursprünglichen, nicht modifizierten Moleküls erfordern. Ein Protein kann beispielsweise biotinyliert werden, seinen Interaktor binden, dann in einer Streptavidin-Säule aufgenommen und schließlich eluiert und durch Reduktion der Disulfid-Bindung mit Dithiothreitol wiedergewonnen werden.

Unsere Biotin-Reagenzien gewährleisten die höchstmögliche Gesamtproduktintegrität, -konsistenz und -leistung für die vorgesehenen Forschungsanwendungen.

Biotinylierungsreagenzien unterscheiden sich bei Reaktivität, Länge, Löslichkeit, Zellgängigkeit und Spaltbarkeit. Es stehen drei Arten von Sulfhydryl-reaktiven Verbindungen zur Verfügung: Maleimido, Iodacetyl und Pyridyldithiol. Pyridyldithiol-Reagenzien reagieren spezifisch mit Sulfhydryl-Gruppen (-SH) in nahezu neutralen Puffern, um reversible Disulfid-Bindungen zu bilden.

Bei den Proteinen gibt es Sulfhydryle, die Cystein(C)-Reste aufweisen. Cystin-Disulfid-Bindungen müssen reduziert werden, um Sulfhydryl-Gruppen für die Markierung zur Verfügung zu stellen. Disulfid-Brücken in der Scharnierregion von Antikörpern können selektiv reduziert werden, um funktionelle Halbantikörper zu bilden, die markiert werden können.

Anwendungen:
• Abruf von Zelloberflächenrezeptoren und Abspaltung von Biotin in einer Säule mit immobilisiertem Avidin