Reactivo de ensayo Pierce™ Coomassie Plus (Bradford)

El ensayo de proteínas Pierce Coomassie Plus (Bradford) es un reactivo del ensayo de Bradford mejorado, compatible con agentes reductores y listo para su uso. Se utiliza para medir con rapidez la concentración total de proteínas en comparación con un estándar de proteínas. El reactivo de ensayo Pierce Coomassie Plus proporciona una mayor linealidad y la mitad de la variabilidad proteína-proteína que otras formulaciones comerciales de ensayo Bradford.

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Las características del ensayo de proteínas Coomassie Plus incluyen:
• Colorimétrico: medición con un espectrofotómetro estándar o lector de placas a 595 nm
• Facilidad de uso: único reactivo; no requiere la preparación de un reactivo de trabajo
• Rápido: desarrollo prácticamente inmediato del color; agregar, mezclar y leer los resultados
• Intervalo del ensayo: detecta una concentración de proteínas en el rango de 1 a 1500 µg/ml
• Mejor: linealidad mejorada y uniformidad de respuesta en comparación con las formulaciones de Bradford tradicionales
• Flexible: protocolos de microplaca flexible y cubeta proporcionados y adaptables a varios rangos de trabajo objetivo

El reactivo de ensayo Pierce Coomassie Plus es una solución única lista para su uso para medir la concentración de proteínas. Añada el reactivo para igualar los volúmenes de muestras y estándares, mezcle y mida la absorbencia a 595 nm. El ensayo se puede realizar en formato de microplaca o de tubo de ensayo. El ensayo de proteínas es compatible con la mayoría de las sales, disolventes, tampones, tioles, sustancias de reducción y agentes quelantes de metal que forman parte de las muestras de proteínas.

Cómo detecta las proteínas el ensayo Coomassie Plus (Bradford) detecta
El uso de colorante Coomassie G-250 en un reactivo colorimétrico para la detección y cuantificación de proteínas totales lo describió por primera vez el Dr. Marion Bradford, en 1976. En el ambiente ácido del reactivo, la proteína se une al colorante Coomassie. Esto se traduce en un cambio espectral de la forma rojiza/marrón del colorante (absorbancia máxima a 465 nm) a la forma azul del colorante (absorbancia máxima a 610 nm). La diferencia entre las dos formas del colorante es máxima a 595 nm, por lo que esta es la longitud de onda óptima para medir el color azul del complejo proteína-colorante Coomassie. Si lo desea, el color azul puede medirse en cualquier longitud de onda de entre 575 nm y 615 nm. En los dos extremos (575 nm y 615 nm), se produce una pérdida de alrededor del 10 % de la cantidad de color medida (absorbancia) en comparación con la que se obtiene a 595 nm.

El desarrollo de color en ensayos de proteínas basados en colorantes Coomassie (Bradford) se ha relacionado con la presencia de determinados aminoácidos básicos (principalmente arginina, lisina e histidina) en la proteína. Las fuerzas de Van der Waals y las interacciones hidrófobas también participan en la unión del colorante mediante proteínas. El número de ligandos de colorantes Coomassie unido a cada molécula de proteína es aproximadamente proporcional al número de cargas positivas detectadas en la proteína. Los aminoácidos libres, los péptidos y las proteínas de bajo peso molecular no producen color con los reactivos de colorantes Coomassie. En general, la masa de un péptido o proteína debe ser de al menos 3000 daltons para someterse a un ensayo con este reactivo.

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