HisPur™ Ni-NTA-Agarose Superflow

Thermo Scientific HisPur Ni-NTA Superflow Agarose ist ein mit Nitrilotriessigsäure (NTA) modifizierter Superflow 6-Träger, der mit divalenten Nickelionen (Ni⁺²) beladen wurde und sich für die FPLC-Reinigung von Proteinen mit Polyhistidin-Tags eignet.

Merkmale von HisPur Ni-NTA Superflow Agarose:

• Hohe Kapazität — Bindet mehr als 20 mg His-markiertes GFP pro Milliliter Hart bei einer linearen Flussrate von 300 cm/Stunde
• Hohe Reinheit — Bietet eine Reinheit von mehr als 80 % der eluierten Fraktionen, wenn es zur Reinigung von Lysaten verwendet wird
• Vielseitig — Kann genutzt werden, um Proteine unter nativen und denaturierenden Bedingungen zu reinigen
• Robust — Stark quervernetzte Beads tolerieren lineare Flussraten von bis zu 1.200 cm/Stunde• Kompatibel — Bleibt bei einer Vielzahl von Chemikalien und pH-Bedingungen funktionsfähig
• Kosteneffektiv — Dieses Hart zu einem wettbewerbsfähigen Preis bleibt über mehrere Reinigungs- und Wiederverwendungszyklen hinweg stabil

HisPur Ni-NTA Superflow Agarose ist ein stark vernetztes, langlebiges Harz, das bei den Flussraten im Rahmen einer FPLC-Reinigung in mittlerem bis großem Maßstab nicht komprimiert wird. Das Resin ist gegen eine Reihe von Chemikalien und pH-Werten beständig und kompatibel mit häufigen In-Situ-Reinigungsverfahren. Im Vergleich zu Kobalt und anderen Liganden für die immobilisierte Metallaffinitätschromatographie (IMAC) sorgt Nickel für größere Kapazitäten bei der Reinigung von Proteinen mit His-Tags. HisPur Ni-NTA Superflow Agarose besitzt eine hohe dynamische Bindungskapazität über eine Bandbreite an Flussraten und eignet sich daher sehr gut für Aufreinigungen im größeren Maßstab.

Anwendungen:
• FPLC-Aufreinigung von Polyhistidin-getaggten Proteinen in mittlerem bis großem Maßstab

Affinitätschromatographie wird oft als schnelles und problemloses Verfahren zur Aufreinigung von rekombinanten Proteinen verwendet. Zu diesen Aufreinigungsmethoden gehört die Bindung von Polyhistidin-Tags an divalente Metallkationen. Diese sind wiederum an die Chelatliganden, die an den Beads des Trägers immobilisiert sind, koordinativ gebunden. Bei der Aufreinigung von His-Tag-Proteinen mit immobilisierter Metallaffinitätschromatographie (IMAC) beeinflussen der Typ des Beads, des Chelatliganden und des immobilisierten Metalls die Leistungen hinsichtlich Reinheit, Ausbeute und Flussrate.

HisPur Ni-NTA Superflow Agarose ist ein mit Nitrilotriessigsäure (NTA) modifizierter Superflow 6-Träger, der mit zweiwertigem Nickel (Ni+2) beladen wurde und sich für die FPLC-Reinigung von Poly-Histidin-getaggten Proteinen eignet. Zur Demonstration der Leistungsfähigkeit wurde 6xHis-GFP in einem 100 l-Reaktor überexprimiert und die Zellmasse in mehreren Fraktionen gesammelt. Ein Teil der Biomasse (240 g) wurde in 2 l Lysepuffer mit Zusatz von Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor (Art.-Nr. 78439) lysiert. Das Lysat wurde geklärt und in zwei Fraktionen aufgeteilt. Das Zielprotein wurde mit HisPur Ni-NTA Superflow Agarose sowie mit dem Harz eines führenden Konkurrenzunternehmens in äquivalenten 200 ml-Säulen mit gepackten Beads aufgereinigt. Die Gesamtausbeute, -rückgewinnung und -reinheit (> 80 %) waren für beide Harze nahezu identisch, und mehr als 4 Gramm Zielprotein wurden in weniger als 3 Stunden gereinigt.

Weitere Produktdaten
• Leistungscharakterisierung von HisPur Ni-NTA Superflow Agarose

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