Imject™ BSA (in MES Buffer)

Thermo Scientific Imject BSA in MES-Puffer ist gereinigtes Rinderserumalbumin-Trägerprotein, das eine einfache Vorbereitung wirksamer Immunogene mit Amin- oder Carboxyl-Peptid-Antigenen ermöglicht.

BSA ist ein beliebtes immunogenes Trägerprotein zur Vorbereitung von Peptid-Antigenen für die Immunisierung und Antikörperproduktion. Die Zubereitungen in MES-Puffer wurden für die Konjugation von Peptid und Trägerprotein über carboxylreaktive Carbodiimid-Crosslinker (EDC oder auch EDAC genannt) optimiert.

Merkmale von Imject BSA in MES:

• Konjugation mit hoher Ausbeute – jedes Molekül besteht aus 59 Lysinresten, von denen 30 bis 35 über primäre Amine verfügen, die mit einem Konjugationsreagenz reagieren können
• Validierte Qualität – gereinigtes BSA (Fraktion V) ist in PBS- oder MES-Puffer lyophilisiert und stabilisiert und gebrauchsfertig in Glutaraldehyd-, NHS-Ester- oder EDC-Vernetzungsverfahren
• Kompatible Löslichkeit – zahlreiche Carboxylgruppen machen die negative Nettoladung (pI 5,1) von BSA und ihre hohe Löslichkeit aus, wodurch sie in unter vielfältigen Konjugationsbedingungen eingesetzt werden kann
• Immunogen – bei 67 kDa ist die BSA ausreichend groß, um als Primärimmunogen zu fungieren, oder sie kann als irrelevanter Proteinträger für Antikörperscreening und Immunoassays verwendet werden, nachdem KLH als Trägerprotein verwendet wurde, um die Immunantwort gegen die Haptene zu erzeugen

Trägerproteine sind große, komplexe Moleküle, die nach einer Injektion eine Immunantwort auslösen. Wenn Antikörper hergestellt werden sollen, die spezifisch auf kleine Antigene (z. B. Peptide oder Arzneimittelverbindungen) reagieren, dann müssen diese Haptene kovalent an ein größeres, komplexeres Molekül (in der Regel ein Protein) gebunden (konjugiert) werden, um ihnen eine immunogene Wirkung zu verleihen. Die Wahl des Trägerproteins basiert auf der Immunogenität, Löslichkeit und einer ausreichenden Konjugation von Hapten und Trägerprotein. Imject BSA ist in wässrigen Puffern sehr gut löslich und enthält zahlreiche primäre Amine und Carboxylgruppen, die für eine Konjugation mit Glutaraldehyd, NHS-Estern und anderen Crosslinker-Reagenzien zur Verfügung stehen. Imject BSA wurde aufgereinigt und in Puffern gefriergetrocknet, die für eine optimale Stabilität und Löslichkeit bei Haptenkonjugationen sorgen.

Rinderserumalbumin (BSA) ist ein praktisches Protein für viele Anwendungen im Labor, da es wie die meisten häufig vorkommenden Plasmaproteine sehr stabil und löslich ist. Darüber hinaus ist das 67 kDa-Protein groß und komplex genug, um eine kräftige immunogene Wirkung hervorzurufen. Daher ist BSA ein häufig eingesetztes Trägerprotein für die Konjugation von Haptenen und anderen schwachen Antigenen zur Verbesserung ihrer immunogenen Eigenschaften, damit Antikörper hergestellt werden können. Es bietet außerdem ein unabhängiges Hapten-Trägerprotein für Mikrotiterplatten und andere Assay-Verfahren, die zur Untersuchung von Antikörpern erforderlich sind, die mit KLH oder einem anderen immunogenen Träger erzeugt wurden.

Der Carbodiimid-Crosslinker EDC konjugiert Haptene mit Carboxylgruppen (z. B. am C-Terminus des Peptidantigens) mit dem BSA-Trägerprotein. Diese Methode der Immunogenzubereitung eignet sich ideal für Peptidantigene mit wenigen oder gar keinen Asparaginsäure- und Glutaminsäureresten (Carboxylaten) und Lysinresten (primäre Amine) im zentralen Teil der primären Sequenz. Da Peptide sowohl Carboxylate als auch Amine enthalten, führt die Konjugation mit EDC zu einer unterschiedlichen Polymerisierung und zufälligen Ausrichtung an den Bindungsstellen am Trägerprotein. Damit wird gewöhnlich nicht nur eine hohe Beladung des Trägerproteins mit Antigen, sondern auch eine Präsentation in alle möglichen Richtungen erreicht, was die Antikörperproduktion fördert. Allerdings ist es möglich, dass wichtige (d. h. erwünschte) Epitope in der Sequenz des Antigenpeptids bei der EDC-vermittelten Konjugation blockiert werden, wenn die betroffenen Regionen primäre Amine (Lysinreste) oder Carboxylate (Asparaginsäure- und Glutaminsäurereste) enthalten. Verwenden Sie in diesen Fällen entweder einen homobifunktionalen aminreaktiven Crosslinker mit dem gereinigten BSA im Phosphatpuffer oder synthetisieren Sie das Peptid mit einem einzelnen terminalen Cystein, und verwenden Sie ein Kit mit Maleimid-aktiviertem BSA, um das Trägerproteinkonjugat zuzubereiten.

Weitere Produktdaten
• Trägerprotein-Aktivierungs- und Konjugationsdaten zur Immunogenzubereitung

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