HisPur™ Ni-NTA Spin Columns, 0.2 mL

Thermo Scientific HisPur Ni-NTA-Spin-Säulen enthalten ein hochleistungsfähiges, Nickel-basiertes IMAC-Harz mit hoher Kapazität zur routinemäßigen Affinitätsreinigung von His-markierten Fusionsproteinen.

Merkmale des HisPur Ni-NTA-Harzes:

• Hohe Kapazität – Bindung von bis zu 60 mg 6XHis-markiertem Protein pro Milliliter Harz
• Vielseitig – Proteine unter nativen oder denaturierenden Bedingungen aufreinigen
• Kompatibel – mit Thermo Scientific Zelllysereagenzien und einer Vielzahl von Pufferadditiven zu verwenden
• Kosteneffizient – eine Harzcharge mindestens fünfmal wiederverwenden
• Anwenderfreundlich – vorformulierte Puffer für Kit-Formate
• Flexibel – erhältlich in verschiedenen Formaten, einschließlich Harzmasse, Spin-Säulen, Chromatographiekartuschen und 96 Well-Filterplatten

Der speziell vorbereitete Träger besteht aus einer mit Nitrilotriessigsäure (NTA) derivatisierten Agarose, die mit zweiwertigen Nickel-Ionen (Ni²⁺) beladen ist. Das immobilisierte Metallaffinitätschromatographieharz (IMAC) bietet außergewöhnliches Bindungsvermögen und Leistung für die rekombinante His-markierte Proteinaufreinigung.

Die Expression und Aufreinigung rekombinanter Proteine ist zentral für Proteinregulation, Struktur- und Funktionsstudien. Die Mehrheit der rekombinanten Proteine ist als Fusionsprotein mit kurzen Affinitäts-Tags exprimiert; das gängigste darunter ist Polyhistidin-Tags (6x His). Die Methode zur Reinigung rekombinanter His-Tag-Proteine ist die immobilisierte Metallaffinitätschromatographie (IMAC), die aus Chelatharzen besteht, die entweder mit Nickel- oder mit Cobaltionen geladen sind und sich mit den Histidin-Seitenketten koordinieren.

HisPur Ni-NTA-Harz reinigt effektiv hohe Mengen an überexprimierten His-Tag-Fusionsproteinen aus bakteriellen Lysaten, wie sie mit Thermo Scientific B-PER Bacterial Protein Extraktionsreagenzien erreicht werden. Das Harz zeigt sowohl bei Batch- als auch bei Zentrifugations-basierten Verfahren in unterschiedlichen Maßstäben gute Leistungen. Dabei entspricht oder übertrifft die Performance die von gängigen Ni-NTA-Harzen anderer Anbieter. HisPur Ni-NTA Resin ist ein hochwertiger, stabiler und belastbarer Affinitätsträger. Tests bestätigen, dass die Leistung auch nach mindestens fünf Wiederverwendungen nicht nachlässt. Diese Daten zeigten, dass das Harz während des normalen Gebrauchs sehr widerstandsfähig gegen Strukturabbau oder Auslaugen von Nickel-Ionen ist.

HisPur Ni-NTA Harz und HisPur Cobalt Harz sind alternative Formen von IMAC: Erstere verwendet Nickel, Letztere verwendet Kobalt als das chelierte Metallion, das für die His-Tag-Bindung verantwortlich ist. Das meist verwendete IMAC-Harz für die Reinigung von 6xHis-Tag-Proteinen sind Ni-NTA Harze, denn aufgrund der vier Metallbindungsstellen auf dem Chelat verbinden sie hohe Proteinbindungskapazitäten mit geringem Auslaugen von Metallionen. Cobalt bindet weniger stark und daher stärker diskriminante Bindungen ein, was sich bei der Reinigung von His-Tag-Proteinen durch höhere Reinheit und geringere Erträgen auswirkt.

Lieferbare Formate:
• Harzaufschlämmung—vernetzte 6%-ige Agarose-Beads; 10 ml-, 100 ml-, 500 ml-Flaschen
• Spin-Säulen—0,2 ml (Mikrozentrifuge), 1 ml-, 3 ml-Säulen
• Aufreinigungskits—Komplettkits in allen drei Säulengrößen
• Chromatographie-Kassetten—Weitere Daten zu den HisPur Chromatographie-Kassettendaten
• 96-Well-Spin-Platten

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