1-Step Human High-Yield IVT Kit

Die Thermo Scientific 1-Step Human High-Yield In Vitro Translation (IVT) Kits ermöglichen das Exprimieren von funktionellen Proteinen mit einer 10- bis 100-mal höheren Ausbeute pro Milliliter als andere Säugetier-IVT-Systeme.

Das 1-schrittige IVT-System mit hoher Ausbeute nutzt modifizierte HeLa-Zellextrakte, um die Vorteile des robusten humanen Translationsmechanismus zu nutzen und funktionelle Volllänge-Proteine zu erzeugen. In diesem System erfolgt die Proteinexpression in einer firmeneigenen Mini-Dialysevorrichtung, die eine kontinuierliche Zufuhr von Nukleotiden, Aminosäuren und energieerzeugenden Substraten in die Reaktion ermöglicht und gleichzeitig Inhibitoren der Proteinsynthese entfernt. Dieses CECF-System (continuous-exchange cell-free system) ermöglicht die Proteinexpression in einer über Nacht laufenden Inkubation von bis zu 750 µg/ml. Das komplette Kit zur Anwendung im großen Maßstab enthält alle Komponenten, die für die Transkription und Translation eines rekombinanten Gens erforderlich sind, einschließlich eines optimierten Expressionsvektors.

Merkmale des 1-Step Human High-Yield Maxi IVT Kits:

• Hohe Expression — Expression von bis zu 750 µg/ml Protein
• Reproduzierbarkeit — Geringe Variabilität zwischen Experimenten
• Schnell — Exprimiert hohe Proteinkonzentrationen mit einer 6-Stunden- bis zur Über-Nacht-Inkubation
• Funktionell — Ergibt funktionell aktive Proteine, einschließlich solcher, die Disulfid-Bindungen enthalten

1-schrittige Proteinexpression:
• Anwenderfreundlich — Transkription und Translation erfolgt in einem Reaktionsschritt
• Anpassen für Markierung — Geeignet zur Einbindung schwerer oder unnatürlicher Aminosäuren

Lieferumfang:
• Die Komplettkits enthalten Zelllysat, Reaktionsgemisch, akzessorische Proteine, 5X Dialysepuffer, Kontroll-DNA, Klonierungsvektor, Dialysevorrichtungen und Zentrifugenröhrchen

Erforderlich:
• 30 °C-Inkubator oder Wasserbad (ein Inkubationsschüttler erhöht die Expression um 30 bis 50 %)

Anwendungen:
• Produktion von rekombinanten Proteinen für Strukturanalysen
• Erzeugen von aktiven Proteinen für Proteinwechselwirkungsstudien
• Durchführung schneller Expression und Charakterisierung von Mutantenproteinen
• Kleinserienproduktion von viralen Partikeln
• Einbinden von unnatürlichen Aminosäuren oder Produktion toxischer Proteine

Die 1-Step Human High-Yield IVT Kits sind zellfreie Proteinexpressionssysteme, die alle der für die Transkription und Translation benötigten Komponenten bereitstellen. Die Kits sind mithilfe von akzessorischen Proteinen und Reaktionsgemischen optimiert, die die Proteinsynthese mithilfe eines DNA-Templates unterstützen. Die Vorteile der 1-Step Human High-Yield IVT Kits gegenüber herkömmlichen In-vivo-Expressionssystemen bestehen in der Fähigkeit, toxische oder unlösliche Proteine zu exprimieren, in der einfachen Durchführung von Proteinmarkierungen mit modifizierten Aminosäuren und in der Verringerung des Zeit- und Kostenaufwands für die Expression humaner Proteine in Gewebekulturzellen. Die 1-Step Human IVT Kits sind für die Verwendung mit dem pT7CFE1-Expressionsvektor optimiert, der den T7-Viruspromotor und eine EMCV-interne ribosomale Eintrittsstelle (IRES) verwendet und damit hohe Konzentrationen bei der In-vitro-Proteinexpression ermöglicht. Die Verwendung eines pT7CFE-Vektors ist für den Erhalt hoher Expressionswerte von entscheidender Bedeutung. Für zusätzlichen Komfort steht eine Familie von pT7CFE-Vektoren mit Tandem-Affinitätstags zur Verfügung, um Proteinnachweis und -aufreinigung zu erleichtern. (Für kleinere Skalierungs- und Screening-Optionen sollten Sie das 1-Step Human Coupled IVT Kit in Betracht ziehen.)

Weitere Produktangaben
• Auswahl eines Vektor- und Aufreinigungsverfahrens für die In-vitro-Proteinexpression
• System für hochergiebige In-vitro-Transkription
• Expression hochaktiver Proteine mit einem zellfreien menschlichen IVT-System