CloneMiner™ II cDNA Library Construction Kit

Das CloneMiner™ II Kit zum Erstellen von cDNA-Bibliotheken ist ein CloneMiner™ Kit der zweiten Generation, das den schnellen Aufbau von hochgradig repräsentativen cDNA-Bibliotheken ohne Restriktionsenzym-Klonierung ermöglicht. Diese innovative Technologie zum Erstellen von Bibliotheken kombiniert SuperScript™ III Reverse Transkriptase mit Gateway™ Klonierungstechnologie, was zur Entdeckung bisher nicht erreichbarer Klone in voller Länge führt. Das Kit vermeidet die Verwendung von zeitaufwendigen, ineffizienten Ligationsreaktionen, was die Bibliothekenkonstruktion beschleunigt und eine bessere Darstellung ermöglicht.

Das CloneMiner™ II cDNA-Bibliotheken-Konstruktionskit sorgt für Folgendes:
• Hohe Primärtiter
• Große durchschnittliche Insertgrößen
• Höchster Prozentsatz an Voll-Länge-Genen
• Hocheffiziente Klonierung von cDNA auf mehrere Zielvektoren ohne Restriktionsenzymverdau und Ligation:

Funktionsweise des CloneMiner™ II Kits:

• Hohe Ausbeuten von cDNA mit voller Länge: Das CloneMiner™ II Kit enthält SuperScript™ III für die Erzeugung hoher cDNA-Erträge. SuperScript™ III reverse Transkriptase (RT), eine firmeneigene Mutation von SuperScript™ II RT, ist bei 50 °C aktiv und hat eine Halbwertszeit von 220 Minuten. Es hat auch eine Punktmutation, die die RNase H-Aktivität reduziert, dadurch den RNA-Abbau während der Erststrangsynthese verringert und den Prozentsatz der Gene in voller Länge erhöht.

• Gateway™ Klonierungstechnologie vermeidet Restriktionsenzymklonierung: Das Erstellen der Bibliothek wird durch Gateway™ Technologie vermittelt, ein stellenspezifisches Rekombinationssystem, das die Verwendung von Restriktionsenzymen und Ligase beim Klonen eliminiert. Jede cDNA-Insertion wird flankiert von spezifischen att-Rekombinationsstellen (hinzugefügt während der cDNA-Syntheseschritte), die sich mit komplementären att-Standorten in Gateway™ Spendervektoren rekombinieren, um Entry-Klone zu erstellen. Die Entry-Klone werden anschließend mit Gateway™ Expressionsvektoren rekombiniert, um Expressionsklone zu erstellen, wodurch die Verwendung von Restriktionsenzymen und Ligase wirkungsvoll ersetzt wird. Die resultierenden Klone behalten die ursprüngliche Ausrichtung und den ursprünglichen Leserahmen bei, was eine funktionelle Analyse von Genen in voller Länge und ganzer Bibliotheken ermöglicht.

Inwiefern unterscheidet sich dieses Kit vom Original CloneMiner™ Kit?
• Das neue Kit enthält ein vereinfachtes Protokoll.
• Um hohe cDNA-Ausbeuten zu gewährleisten, wurde die SuperScript™ II Reverse Transkriptase (RT) durch SuperScript™ III Reverse Transkriptase ersetzt.
• Um eine Reaktionsvorbereitung mit weniger Pipettierschritten zu ermöglichen, wurde das Gateway™ BP Clonase™ Enzymgemisch durch Gateway™ BP Clonase™ II Enzymgemisch ersetzt, das Enzyme und Puffer in einem einzigen Gemisch enthält.