GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with CD4 Enrichment Kit (with competent cells)
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GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with CD4 Enrichment Kit (with competent cells)

El vector de nucleasa de CRISPR GeneArt™ con kit de enriquecimiento de CD4 es un sistema vectorial para la expresiónMás información
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Número de catálogoCantidad
A2117710 reactions
Número de catálogo A21177
Precio (MXN)
-
Cantidad:
10 reactions
El vector de nucleasa de CRISPR GeneArt™ con kit de enriquecimiento de CD4 es un sistema vectorial para la expresión de los componentes funcionales necesarios para la edición de genoma CRISPR-Cas9 en células de mamíferos con un indicador CD4. El indicador CD4 permite el enriquecimiento a base de gránulos, una opción para la clasificación/enriquecimiento a base de gránulos magnéticos de células que expresan Cas9 y CRISPR utilizando partículas magnéticas de CD4 Dynabeads™. La eficacia de la transfección también puede ser rastreada usando anticuerpos fluorescentes anti-CD4. Los vectores de nucleasa linealizados CRISPR GeneArt™ ofrecen un método rápido y eficaz para clonar oligonucleótidos bicatenarios a través de una codificación de ARNcr que representa un objetivo deseado en un casete de expresión que permite el etiquetado específico de secuencia de la nucleasa Cas9. Esta versión del kit incluye células competentes OneShot™ TOP10. También está disponible una versión sin células competentes (n.º de cat. A21175).

El sistema de vectores de nucleasa GeneArt™ CRISPR con células competentes ofrece:

• Sistema de ingeniería genómica fácil de diseñar
• Vectores de clonación asequibles y listos para su uso
• Enriquecimiento para líneas de células difíciles de transfectar complicadas de modificar
• Células competentes incluidas para mayor comodidad y máxima eficacia de clonación

Sistema vectorial todo en uno para edición genómica basada en CRISPR
El kit de vectores de nucleasa GeneArt™ CRISPR ofrece un sencillo sistema de vectores de expresión todo en uno listo para su uso que consta de un casete de expresión de nucleasa Cas9 y un casete de clonación de ARN guía (ARNg) para la clonación rápida y eficaz del ADN que codifica el ARN CRISPR específico del objetivo (ARNcr). Este sistema le permite editar y diseñar el locus genómico que elija de forma específica de secuencia a partir de un único plásmido. Una vez identificados los objetivos relevantes con vectores de CRISPR GeneArt™ rápidos y fáciles de usar, las mutaciones biológicamente relevantes pueden crearse precisamente con los TAL de precisión GeneArt™, con alta especificidad y bajos efectos fuera del objetivo.

¿Necesita ayuda con el diseño ARNg de CRISPR?
Nuestra nueva herramienta de búsqueda y diseño de CRISPR le permite buscar en nuestra base de datos de > 600 000 ARNg de CRISPR prediseñados en genes humanos y de ratón o analizar su secuencia de interés para diseños ARNg de novo utilizando nuestros exclusivos algoritmos. Las secuencias CRISPR están optimizadas para Knockout genético y se centran en los tres primeros exones transcritos para cada gen. Los resultados de la búsqueda incluyen las 6 principales secuencias CRISPR con puntos PAM, mapas de exones con puntos de unión de ARNg y posibles puntos de unión inespecíficos para cada secuencia CRISPR. La herramienta diseñará el formato de ARNg correcto para el producto CRISPR-Cas9 preferido, incluidos oligonucleótidos para su vector de nucleasa de CRISPR GeneArt™. Comience a diseñar hoy >

Recursos
Protocolo demostrado: Células madre de ingeniería con CRISPR-Cas9
protocolo demostrado: Microinyección CRISPR-Cas9 en ratones y embriones de pez cebra
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de clonaciónEnzimas de restricción/MCS
FormatoKit
N.º de reacciones10 reacciones
Sobrante3' overhangs
Línea de productosGeneArt
Tipo de productoVector de nucleasa Crispr con kit de enriquecimiento de CD4
PromotorU6, CMV
Etiqueta de proteínaFusión de CD4
Cantidad10 reactions
Gen marcadorCD4
Material de partidaOligos (DNA)
Suficiente para10 reacciones
TécnicaCRISPR-Cas9
Método de detecciónSonda de cebado
Para utilizar con (aplicación)Gene Expression, Cloning
FormularioLíquido
Velocidad de reacciónFast
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• Vector de nucleasa de CRISPR CD4, linealizado
• Tampón de recocido de oligonucleótido 10X
• Agua sin ADNasa/ARNasa
• Tampón de ligado 5X
• Ligasa de ADN T4
• Primer U6 de secuenciación de avance
• Control de oligonucleótido bicatenario
Almacenar a una temperatura de entre -5 y -30 °C.

• Células químicamente competentes Oneshot™ TOP10
Almacenar a -80 °C.

Preguntas frecuentes

What is CRISPR-STOP?

CRISPR-STOP is a method of inserting STOP codon sequences to generate knockouts.

Please refer to the following article: CRISPR-STOP: gene silencing through base-editing-induced nonsense mutations.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Genome Editing Support Center.

How do I check for off-target effects in my CRISPR-modified cell lines?

The only complete way to confirm that there are no off-target effects is to sequence the entire genome of your cell. Alternatively, a less thorough means of checking for off-target editing is to perform targeted sequencing of sequences with the highest probability of off-target effects (i.e., most similar to your CRISPR target region).

How many guide RNAs do you recommend designing against my desired edit locus?

A single guide RNA (gRNA) is all that is required for targeting, but we do recommend testing 2-3 gRNAs against each locus being targeted for cleavage. Testing multiple gRNAs increases the chances of finding a gRNA with high editing efficiency, which will reduce the screening time required to identify the clone of interest.

What are the benefits of using TAL/TALEN-based genome editing compared to your CRISPR system?

Invitrogen GeneArt Precision TALs, in addition to gene deletion, down-regulation and integration, can also be used for gene activation. Additionally, the system is based on a protein-DNA system, in contrast to CRISPR, which is based on a RNA-DNA system. TALs can be used to target any gene in any cell, including mammalian, bacterial, yeast, plants, insect, stem cells and zebrafish. Lastly, off-target effects are low when using the TAL system. Please refer to the following paper (http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816561500200X) where the authors compared TALs and CRISPR technology.

I am using the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit and am getting very few ampicillin-resistant colonies on my selection plate. What could be the cause of this? Do you have any suggestions?

Here are possible reasons and solutions:

- Single-stranded (ss) oligonucleotides designed incorrectly; Make sure that each ss oligonucleotide contains the 5 nucleotides on the 3′ end required for cloning into the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector: ie., Top strand includes GTTTT on the 3′ end; Bottom strand includes CGGTG on the 3′ end.

- Double-stranded (ds) oligonucleotides were degraded; Store the 5 nM ds oligonucleotide stock in 1X Oligonucleotide Annealing Buffer. Avoid repeated freeze/thaw cycles; aliquot the 5 nM ds oligonucleotide stock and store at -20°C.

- Oligonucleotide annealing reaction inefficient; Ensure that the annealing reaction was performed as directed. If ambient temperature is >25°C, incubate the annealing reaction in a 25°C incubator.

Citations & References (1)

Citations & References
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More