Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotine EZ-Link™, format No-Weigh™

Thermo Scientific EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin est un réactif de marquage, réactif à l’amine, chaîne longue dont le groupe similaire à la biotine est éluable à partir de la streptavidine, ce qui le rend idéal pour le marquage et la purification des protéines de surface cellulaire.

Caractéristiques d’EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin :

• Desthiobiotine — analogue de la biotine permet une élution facile à partir de la streptavidine, une caractéristique idéale pour les applications de purification par affinité
• Marquage de protéines — marque les anticorps ou les protéines dans des échantillons purifiés ou mélangés pour permettre une récupération élevée dans des analyses de co-précipitation avec des microbilles de streptavidine
• Marquage de surface cellulaire — ne modifie que les protéines de surface de cellules entières car le réactif, chargé négativement, ne traverse pas les membranes cellulaires
• Réactif à l’amine — réagit avec les amines primaires (-NH2), tels que les chaînes latérales de la lysine (K) ou avec les amines N-terminales des polypeptides
• Soluble — le groupe sulfo-NHS chargé augmente la solubilité dans l’eau du réactif par rapport aux composés NHS-ester ordinaires

Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotine est une variante de la biotine qui est activée comme un ester sulfo-NHS avec un bras espaceur à longue chaîne (LC) pour marquer de manière covalente les amines primaires (-NH2) de protéines ou d’autres molécules avec des groupes de desthibiotine. Le marqueur de la desthiobiotine se lie à la streptavidine et à d’autres protéines liant la biotine à haute spécificité mais s’éloigne facilement avec des conditions douces (par ex., par déplacement compétitif avec la biotine stable et libre). À ce titre, ce réactif est une alternative utile à la Sulfo-NHS-LC-Biotin (n° de réf 21335) pour les techniques d’avidine-biotine dans lesquelles l’élution non dénaturante des protéines marquées est souhaitée. Le groupe sulfo-NHS chargé négativement empêche ce réactif de pénétrer dans les membranes cellulaires ; par conséquent, la sulfo-NHS-LC-Desthiobiotine peut être utilisée pour limiter le marquage aux protéines de surface cellulaire des cellules intactes. Le format No-Weigh (flacons refermables de 5 x 1 mg) élimine les difficultés associées à la pesée de petites quantités de réactif et renforce la protection du réactif inutilisé contre l’hydrolyse.

Desthiobiotine contre Biotine
La desthiobiotine est un analogue de la biotine sans soufre et à anneau unique qui se lie à la streptavidine avec une spécificité presque égale, mais avec moins d’affinité que la biotine (1/Kd = 10¹¹ contre 10¹⁵ M, respectivement). Par conséquent, les protéines d’appât déthiobiotinylées et leurs partenaires en interaction peuvent être facilement et spécifiquement éluées de la résine d’affinité de streptavidine en utilisant des conditions douces basées sur un déplacement compétitif avec la biotine libre. Pour les expériences de dosage par extraction avec des échantillons biologiques, cette caractéristique de libération douce de la desthiobiotine permet également de minimiser la co-purification de molécules biotinylées endogènes, qui restent liées à la streptavidine lors de l’élution des complexes protéiques cibles avec la biotine libre. Le système d’affinité avidine-biotine modifié élimine également la nécessité d’utiliser des conditions d’élution difficiles qui peuvent dissocier des complexes et/ou endommager la protéine ou la cellule cible. Les techniques basées sur la desthiobiotine sont idéales lorsque vous utilisez des protéines natives ou recombinantes qui ne sont pas exprimées avec une étiquette de fusion et lorsque vous isolez des protéines capturées dans des conditions natives, telles que le ciblage de cellules intactes ou de protéines de surface cellulaire.

Marquage avec les réactifs d’ester NHS 
les esters N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) de biotine sont le type de réactif de biotinylation le plus populaire. Les biotines activées par NHS réagissent efficacement avec les groupes amines primaires (-NH2) des tampons alcalins pour former des liaisons amides stables. Les protéines présentent généralement plusieurs amines primaires qui peuvent servir de cibles au marquage, notamment la chaîne latérale de la lysine (K) et les extrémités N-terminal de chaque polypeptide. La plupart des esters sulfo-NHS sont directement hydrosolubles mais ne sont pas perméables à la membrane. Les esters NHS simples sont moins solubles dans des tampons aqueux mais perméables à la membrane.