Le système de clonage Echo™ est un système à deux vecteurs qui utilise le système de recombinaison spécifique au site Cre-lox du bactériophage P1 (1,2) pour un clonage rapide avec plusieurs vecteurs. Votre gène d’intérêt est cloné dans l’un des vecteurs donneurs spécialement conçus. Ces derniers peuvent ensuite être recombinés avec autant de vecteurs accepteurs d’Echo™ différents que vous voulez. Les vecteurs donneurs et accepteurs sont placés dans un tampon contenant de la recombinase Cre pour déclencher une réaction de recombinaison in vitro de 25 minutes. La recombinase Cre se lie au site lox présent sur chaque vecteur, les rassemble, puis coupe et fixe par covalence les brins d’ADN. Résulte en la fusion des vecteurs donneurs et accepteurs formant un vecteur d’expression fonctionnelle unique.
Les cellules compétentes PIR1 sont destinées au clonage et à la maintenance de votre vecteur donneur développé (c.-à-d. pUniV5/His-TOPO™) (ou d’un autre vecteur contenant l’origine R6K gamma). Ce système contient un allèle mutant du gène PIR qui maintient la construction du vecteur donneur à ∼ 250 copies par cellule.