Exonuclease III (200 U/μL)

Thermo Scientific Exonuclease III (Exo III) weist vier katalytische Aktivitäten auf. Die 3‘→5'-Exodeoxyribonuklease-Aktivität von ExoIII ist spezifisch für doppelsträngige DNA. ExoIII degradiert dsDNA von stumpfen Enden, 5'-Überhängen oder -Kerben (sog. „Nicks“), setzt 5'-Mononukleotide von den 3'-Enden der DNA-Stränge frei und produziert Ausdehnungen von einsträngiger DNA. Nicht an 3'-Überhangenden von DNA aktiv, die mindestens vier Basen lang sind und keinen 3'-terminalen C-Rest auf einzelsträngiger DNA oder auf phosphorothioat-verbundenen Nukleotiden tragen.

Die 3'-Phosphatase-Aktivität von ExoIII entfernt das 3'-terminale Phosphat und erzeugt eine 3'-OH-Gruppe. Die Rnase H-Aktivität von ExoIII baut den RNA-Strang aus RNA-DNA-Hybriden exonukleolytisch ab. Die apurinische/apyrimidinische Endonuklease-Aktivität von ExoIII spaltet Phosphodiesterbindungen an apurinischen oder apyrimidinischen Stellen, um 5'-Enden zu produzieren, bei denen es sich um basisfreie Desoxyribose-5'-Phosphat-Reste handelt.

Highlights

• aktiv in Restriktionsenzympuffern

Anwendungen

• Erstellung unidirektionaler Deletionen in DNA-Fragmenten in Verbindung mit S1 Nuclease
• Generierung einer einzelsträngigen Matrize für die Dideoxy-Sequenzierung von DNA
• ortsspezifische Mutagenese
• Klonierung von PCR-Produkten
• Vorbereitung von strangspezifischen Sonden

Hinweis

Die Rate der DNA-Verdauung durch ExoIII hängt von der Temperatur, Salzkonzentration und dem molaren Verhältnis von DNA zum Enzym in der Reaktionsmischung ab. Die optimalen Reaktionsbedingungen müssen experimentell bestimmt werden.