TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ INVαF' Chemically Competent E. coli
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Invitrogen™

TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ INVαF' Chemically Competent E. coli

El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un pasoMás información
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Número de catálogoN.º de reacciones
K205040
también denominado K2050-40
40 reacciones
K20500120 reacciones
Número de catálogo K205040
también denominado K2050-40
Precio (CLP)
-
N.º de reacciones:
40 reacciones
El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un paso para insertar directamente un producto de PCR amplificada con Taq en un vector plasmídico. Los promotores T7 y SP6 del vector pCR™II permiten la transcripción in vitro del inserto para producir productos de sentido o antisentido. El promotor doble del kit TA Cloning usa el vector de clonación pCR™II y ligasa de ADN T4 ExpressLink™ para generar un producto de ligadura en un proceso de ligadura de quince minutos a temperatura ambiente. Las reacciones normalmente producen > 80 % de recombinantes que contienen insertos.

Características del Kit de clonación™ de TA Dual Promoter:
Rápido y cómodo: ligación a temperatura ambiente en 15 minutos
Eficiente: cribaje azul/blanco y > 80 % de los clones con inserto adecuado
Flexible: elección de resistencia a kanamicina o ampicilina para la selección flexible de antibióticos
Sin complicaciones: elimina cualquier modificación enzimática del producto de PCR
Optimizado: no requiere el uso de primers de PCR que contengan sitios de restricción

El vector de pCR™ II proporciona:
• Salientes 3'-T para ligadura directa de productos de PCR amplificada con Taq
• Promotores T7 y SP6 para transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Poliligador versátil con sitios EcoR I flanqueados para fácil escisión de insertos
• Sitios de primer directo e inverso M13 para secuenciación

Cómo funciona TA Cloning™
La polimerasa Taq tiene un actividad no dependiente de la plantilla que añade una sola deoxiadenosina (A) a los extremos 3' de los productos de PCR. El vector linealizado suministrado en este kit tiene residuos de una sola desoxiadenosina 3' (T). Esto permite a los insertos de PCR ligar de forma eficaz con el vector.

Configuraciones del kit
El kit TA Cloning™ se ofrece en una variedad de configuraciones: con E. coli químicamente competente One Shot™ INVF’ (K2050-01 y K2050-40), E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10F’ (K2060-01 y K2060-40) y sin células competentes (K2750-20 y K2750-40) en tamaños de kit de 20 y 40 reacciones.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraINVαF ́
Tipo de célulaE. coli químicamente competente
Método de clonaciónTA Cloning
Para utilizar con (aplicación)Clonación PCR
IncluyeVector pCRII linealizado, ligasa de ADN T4 ExpressLink, tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink, dNTPs, tampón de PCR 10X, agua esterilizada, controles, E. coli químicamente competente INVαF’ One Shot, medio SOC y un plásmido de control superenrollado.
N.º de reacciones40 reacciones
Línea de productosOne Shot
Tipo de productoKit de clonación
PromotorT7, SP6
Cantidad40 rxns
VectorpCRII
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Este kit contiene el vector pCR™II linealizado, la ligasa de ADN T4 ExpressLink™, el tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink™, dNTPs, el tampón de PCR 10X, agua estéril y controles. Los kits de células competentes contienen E. coli químicamente competente One Shot™, medio SOC y un plásmido de control superhelicoidal.

Almacene el E. coli de One Shot™ a - 80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Have you compared in vitro transcription levels between SP6 and T7 promoters in your pCRII vectors?

No, we have not done in-house comparisons of transcription levels. It is widely known though that T7 polymerase produces more RNA than SP6 (on the order of 10-fold higher).

Citations & References (9)

Citations & References
Abstract
Semaphorin III can function as a selective chemorepellent to pattern sensory projections in the spinal cord.
Authors:Messersmith EK, Leonardo ED, Shatz CJ, Tessier-Lavigne M, Goodman CS, Kolodkin AL
Journal:Neuron
PubMed ID:7748562
'Distinct classes of primary sensory neurons in dorsal root ganglia subserve different sensory modalities, terminate in different dorsoventral locations in the spinal cord, and display different neurotrophin response profiles. Large diameter muscle afferents that terminate in the ventral spinal cord are NT-3 responsive, whereas small diameter afferents subserving pain and ... More
Kainate receptor subunits expressed in single cultured hippocampal neurons: molecular and functional variants by RNA editing.
Authors:Ruano D, Lambolez B, Rossier J, Paternain AV, Lerma J
Journal:Neuron
PubMed ID:7748549
To determine the kainate receptor subunits that are found in native kainate receptors, we have applied a multiplex PCR of cDNAs reverse transcribed from mRNA harvested from single cultured hippocampal neurons after electrophysiological recording. We found that all the cells showing rapidly desensitizing currents in response to kainate express the ... More
Map-based cloning of chloronerva, a gene involved in iron uptake of higher plants encoding nicotianamine synthase.
Authors:Ling HQ, Koch G, Baumlein H, Ganal MW
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:10359845
The uptake of iron in plants is a highly regulated process that is induced on iron starvation. In tomato, the mutant chloronerva exhibits constitutive expression of iron uptake responses and intercostal chlorosis. Biochemically, chloronerva is an auxotroph for nicotianamine, a key polyamine in plant iron uptake metabolism. The chloronerva gene ... More
ARIA, a protein that stimulates acetylcholine receptor synthesis, is a member of the neu ligand family.
Authors:Falls DL, Rosen KM, Corfas G, Lane WS, Fischbach GD
Journal:Cell
PubMed ID:8453670
Motor neurons stimulate their postsynaptic muscle targets to synthesize neurotransmitter receptors. Polypeptide signaling molecules may mediate this inductive interaction. Here we report the purification of ARIA, a protein that stimulates the synthesis of muscle acetylcholine receptors, and the isolation of ARIA cDNA. Recombinant ARIA increases acetylcholine receptor synthesis greater than ... More
The accessory subunit of Xenopus laevis mitochondrial DNA polymerase gamma increases processivity of the catalytic subunit of human DNA polymerase gamma and is related to class II aminoacyl-tRNA synthetases.
Authors:Carrodeguas JA, Kobayashi R, Lim SE, Copeland WC, Bogenhagen DF
Journal:Mol Cell Biol
PubMed ID:10330144
Peptide sequences obtained from the accessory subunit of Xenopus laevis mitochondrial DNA (mtDNA) polymerase gamma (pol gamma) were used to clone the cDNA encoding this protein. Amino-terminal sequencing of the mitochondrial protein indicated the presence of a 44-amino-acid mitochondrial targeting sequence, leaving a predicted mature protein with 419 amino acids ... More