El vector de entrada de ARNi BLOCK-iT™ U6 proporciona un enfoque sencillo y optimizado para la clonación de secuencias de ARN de horquilla corta (ARNhc) para la realización de pruebas en transfecciones transitorias para la interferencia de ARN (ARNi), una técnica preferida para analizar la regulación a la baja de genes. Un proceso de clonación fácil coloca un ADN oligonucleótido de ∼50 bp inmediatamente después de un promotor tipo U6 pol III (Figura 1). La expresión de este cassette de ARNi forma una molécula de ARNhc en la célula que se procesará y actuará como ARN de interferencia pequeña (ARNip) que generará el efecto de ARNi.

Entrega del cassette de ARNi U6
Una vez que la clonación se ha completado, el vector de entrada U6 está listo para usarse inmediatamente en transfecciones transitorias utilizando un reactivo como Lipofectamine™ 2000. Esto hace que este sistema sea ideal para la detección inicial de ARNhc en muchos tipos de células de mamíferos. Como alternativa en los tipos de células difíciles de transfectar o sin división, o para entregar a sistemas de modelos animales, el cassette de ARNi puede recombinarse fácilmente en un vector de ARNi viral BLOCK-iT™. Para la entrega y expresión lentiviral de ARNhc estables, vuelva a combinar el vector de entrada BLOCK-iT™ U6 con el vector de ARNi pLenti6/BLOCK-iT™. Para la administración transitoria a tipos de células complicados usando transducción adenoviral, vuelva a combinar con el vector de ARNi pAd/BLOCK-iT™.