Imject™ Maleimide-Activated Ovalbumin

La ovoalbúmina activada con maleimida Thermo Scientific Imject es una ovoalbúmina (OVA) reactiva con grupos sulfhidrilo para la conjugación hapteno-proteína portadora con péptidos que contienen cisteína y otros antígenos tiolados.

Características de la ovoalbúmina activada con maleimida Imject:

• Contiene ovoalbúmina activada con maleimida, suministrada liofilizada en PBS (pH 7,2) con estabilizador.
• Se activa con 5 a 15 moles de maleimida por mol de ovoalbúmina.
• Es ideal para conjugar antígenos peptídicos que contienen cisteína para producir un objetivo de inmunógeno o detección.
• La reacción de conjugación se completa en 2 horas, generando resultados en enlaces de tioéter estables y covalentes.
• Se trata de una proteína polipeptídica sencilla con masa molecular de 45 000 daltons.
• Contiene 14 restos de ácido aspártico y 33 de ácido glutámico cuyos grupos carboxilo son los responsables de la carga negativa neta (pI 4,63) de la OVA.
• No es tan inmunogénica como la KLH (hemocianina de lapa californiana), pero es más soluble en DMSO (dimetil sulfóxido) para aplicaciones que requieran este disolvente.
• Es útil como proteína portadora irrelevante para detección de anticuerpos y en inmunoensayos tras la utilización de KLH como proteína portadora para generar la respuesta inmunitaria contra el hapteno.

Este producto consta de ovoalbúmina purificada para su uso como proteína portadora se ha modificado con el entrecruzador SMCC para unir grupos de maleimida capaces de formar entrecruzamientos covalentes con los grupos sulfhidrilo (-SH) de los restos de cisteína de péptidos y otras moléculas. Los inmunógenos se preparan fácilmente a partir de antígenos peptídicos que se han diseñado con un residuo de cisteína terminal como punto de conjugación preciso. Pueden adherirse varias moléculas de antígeno por molécula de proteína portadora sin bloquear los epítopos previstos al entrecruzarse con aminas primarias o carboxilatos en la secuencia peptídica.

Las proteínas portadoras son moléculas grandes y complejas capaces de estimular una respuesta inmunitaria tras su inyección. La producción satisfactoria de anticuerpos específicos frente a antígenos pequeños (es decir, péptidos o compuestos farmacológicos) requiere que estos haptenos se conjuguen covalentemente a una molécula más grande y más compleja (normalmente una proteína) para hacerlos inmunogénicos. Las proteínas portadoras se seleccionan en función de su inmunogenicidad, su solubilidad y de si se puede lograr una conjugación adecuada con la proteína portadora.

La ovoalbúmina (OVA), la proteína más abundante en la clara del huevo de pollo, resulta una proteína cómoda para una diversidad de aplicaciones en el laboratorio. La proteína de 45 kDa es lo bastante grande y compleja para resultar ligeramente inmunogénica. Por lo tanto, la OVA puede usarse como proteína portadora para la conjugación con haptenos y otros antígenos a fin de hacerlos más inmunogénicos para la inmunización. Si no se usa comúnmente para preparar el inmunógeno primario, la OVA es una proteína portadora muy utilizada para hacer que los antígenos sean más sensibles al análisis (p. ej., ensayos de detección que implican recubrimiento de placas) de anticuerpos producidos con KLH u otra proteína portadora más inmunogénica.

La ovoalbúmina Imject no es tan inmunogénica como otras proteínas, como por ejemplo la hemocianina de lapa californiana (KLH). No obstante, la estructura independiente de la OVA hace que sea especialmente útil como proteína portadora de péptidos y otros antígenos pequeños que por sí mismos son difíciles de manipular en ensayos de detección habituales como el ELISA. Aunque es más hidrófoba y menos soluble en tampones acuosos que la BSA, la ovoalbúmina permanece soluble en hasta un 70 % de DMSO, lo que hace de ella una proteína útil para la conjugación con haptenos que requieran DMSO para su solubilidad. La ovoalbúmina contiene numerosas aminas primarias, algunas de las cuales se han modificado para producir ovoalbúmina activada con maleimida.

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