Solución de nucleasa de micrococos (≥ 100 U/μl)

La nucleasa microcócica (MNasa) Thermo Scientific resulta adecuada para eliminar ácidos nucleicos de lisados celulares, liberar proteínas ligadas a la cromatina y cortar la cromatina para su uso en experimentos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP).

Características de la nucleasa microcócica (MNasa):

• Digiere ácidos nucleicos con enzimas (ADN y ARN)
• Eficaz para ácidos nucleicos bicatenarios, monocatenarios, circulares y lineales
• Activa en condiciones de tampón neutro a alcalino con iones de calcio divalentes
• Se suministran ≥ 100 unidades/µl en 10 mM de Tris-HCl con un pH de 7,5, 50 mM de NaCl, 1 mM de EDTA, 50 % de glicerol

Esta nucleasa microcócica es una forma líquida estable de la enzima derivada de Staphylococcus aureus. La nucleasa microcócica (MNasa) exhibe actividades exo- y endo-5'-fosfodiesterasa frente al ADN y ARN. Esta enzima digiere ácidos nucleicos bicatenarios, monocatenarios, circulares y lineales. La actividad más alta se da hacia sustratos de ácido nucleico monocatenario con preferencia por regiones ricas en AT o AU. La actividad enzimática se produce a un pH 7-10 y depende estrictamente del calcio para la digestión de sustratos de ARN y ADN. La nucleasa microcócica resulta adecuada para eliminar ácidos nucleicos de lisados celulares, liberar proteínas ligadas a la cromatina y cortar la cromatina para su uso en experimentos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP).

Propiedades de la nucleasa microcócica (MNasa):
• El producto es líquido a - 20 °C. Mantenga la enzima en hielo durante su uso.
• La nucleasa microcócica depende del CA++ para su actividad. Evite los queladores de calcio, como el EGTA, en los tampones de reacción.
• La enzima está activa a pH 7-10 con una concentración de sal inferior a 100 mM. La actividad enzimática óptima ocurre a 37 °C; no obstante, la enzima está activa a temperatura ambiente. Los iones metálicos monovalentes, como el Na+ y K+, disminuyen la actividad. El EGTA o el calentamiento a 65 °C durante 10 minutos inactiva la enzima.

Protocolo generalizado para el uso de nucleasa microcócica (MNasa):
• Diluya la muestra en 50 mM de Tris-HCl con un pH de 8,0 y 5 mM de CaCl₂
• Si la muestra solo contiene nucleótidos (es decir, no tiene proteínas), añada BSA a una concentración final de 0,1 mg/ml.
• Añada la nucleasa microcócica e incube la reacción a 37 °C hasta que los nucleótidos se degraden.
• Opcional: Detenga la reacción añadiendo EGTA con pH 8,0 a una concentración final de 20 mm.

Especificaciones de la nucleasa microcócica (n.º de referencia 88216):
• Visual: Líquido transparente e incoloro libre de material no soluble.
• Unidades ≥ 100 unidades/µl
• Información adicional: 1 unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir un aumento en la absorbencia sobre 260 nm de 0,001/min/ml a 25 °C de ADN altamente polimerizado.

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