L-Leucine for SILAC

Los amino ácidos pesados y ligeros Thermo Scientific se utilizan específicamente para analizar la expresión de proteínas mediante espectrometría de masas mediante el uso de kits de cuantificación de etiquetado de isótopos estables con aminoácidos en cultivos celulares (SILAC). Se trata de una preparación liofilizada de L-leucina, suficiente para 10 experimentos de SILAC.

Características generales de aminoácidos pesados y ligeros para etiquetado SILAC:

• Eficaces: incorporación del 100 % de las etiquetas en proteínas de células vivas
• Flexibles: diferentes isótopos flexibles de amino ácidos pesados y/o ligeros para la arginina, la lisina, la leucina y la prolina permiten la cuantificación de péptidos derivados de proteasas de grado MS
• Capacidad de multiplexing: hay varios isótopos alternativos de arginina y lisina disponibles que permiten el análisis de múltiples condiciones de tratamiento en cada experimento
• Suplementos de alta calidad: aminoácidos pesados con >99 % de pureza isotópica

El etiquetado estable de isótopos con aminoácidos en el cultivo celular (SILAC) es un método potente para identificar y cuantificar los cambios diferenciales relativos en muestras de proteínas complejas. Este enfoque emplea la incorporación metabólica in vivo de aminoácidos pesados etiquetados ¹³C o ¹⁵N en proteínas, seguida de análisis por espectrometría de masas (MS) para acelerar la identificación, caracterización y cuantificación de proteínas.

Los amino ácidos pesados y ligeros Thermo Scientific para SILAC se utilizan junto con medios de cultivo celular especializados que son deficientes en amino ácidos esenciales. La L-lisina y L-arginina pesadas y ligeras son los amino ácidos más comunes utilizados para el análisis SILAC de péptidos trípticos. Se pueden analizar fácilmente hasta tres condiciones experimentales distintas con diferentes isótopos de lisina y arginina. Para experimentos de lisina de tres complejos, se utilizan 4,4,5,5-D₄ L-lisina y ¹³C₆ ¹⁵N₂ L-lisina para generar péptidos con desplazamientos de masa de 4- y 8-Da, respectivamente, en comparación con los péptidos generados con lisina ligera. Para experimentos de arginina de tres complejos, se utilizan ¹³C₆ L-arginina y ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-arginina para generar péptidos con cambios de masa de 6- y 10-Da, respectivamente, en comparación con los péptidos generados con arginina ligera. L-leucina es otro amino ácido comúnmente utilizado para el etiquetado SILAC, porque es uno de los aminoácidos más comunes que se encuentran en las secuencias de proteínas. Proline es un amino ácido no esencial que a veces se agrega a los medios SILAC para prevenir la conversión metabólica de arginina pesada a prolina pesada en líneas celulares de mamíferos con alta actividad de arginina deshidrogenasa.

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