El kit Click-iT™ de detección de IHC mediante ensayos colorimétricos tipo TUNEL se utiliza para identificar células apoptóticas en muestras de tejidos y células cultivadas mediante el uso de una pequeña fracción de etiquetado muy específica y una conjugación de estreptavidina y peroxidasa. Tras la incorporación de la fracción de etiquetado en la fragmentación de ADN, la detección se logra mediante una reacción de clic catalizada que añade un grupo de biotina. Tras la adición del conjugado de estreptavidina y peroxidasa y un sustrato de peroxidasa, se genera una señal marrón oscuro que puede detectarse mediante microscopía óptica y almacenarse para futuros análisis.

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• Optimizado para la detección de células apoptóticas en muestras de tejido o de células.
• Ensayo colorimétrico de tipo TUNEL mejorado: mejor incorporación de las etiquetas gracias a una fracción de bajo nivel reactivo
• Aumento de la sensibilidad: la incorporación de etiquetas específicas da como resultado niveles de fondo más bajos y una señal más brillante.
• Resultados con una gran cantidad de contenido: la morfología de las células, el entorno celular y la señal apoptótica son claramente visibles.
• Flexibilidad: el ensayo puede configurarse para 50 pruebas de apoptosis de tipo TUNEL independientes

Las etapas posteriores de la apoptosis se caracterizan por la presencia de cambios en la morfología nuclear, condensación de cromatina, degradación de la envoltura nuclear y fragmentación del ADN. Los ensayos de tipo TUNEL (etiquetado de final de corte de dUTP de terminal deoxinucleotidil transferasa) se basan en la incorporación de dUTP modificados por la terminal deoxinucleotidil transferasa (TdT) en los extremos 3’-OH del ADN fragmentado. Los ensayos colorimétricos tipo TUNEL utilizan las dUTP conjugadas con una fracción de biotina, a las que se añade un conjugado de estreptavidina y peroxidasa y sustrato de peroxidasa, lo que genera una señal apoptótica marrón oscuro. Sin embargo, en los ensayos colorimétricos tipo TUNEL es habitual que el nivel de fondo sea alto, lo que reduce la sensibilidad y especificidad de la señal.

El kit de detección de IHC mediante ensayos colorimétricos tipo TUNEL se ha desarrollado para abordar estos problemas gracias a un dUTP modificado con un grupo de alquinos (un pequeño grupo funcional biortogonal) que permite que el TdT incorpore el nucleótido con mayor facilidad. Después de la incorporación, una reacción de clic muy específica forma un enlace covalente entre la azida de biotina y el grupo alquino. Se añade estreptavidina-peroxidasa (peroxidasa de rábano) seguida de sustrato de peroxidasa (DAB), lo que permite la detección colorimétrica de células apoptóticas. El alto grado de especificidad de etiquetado de la tecnología clic genera un nivel de fondo bajo y una mejor detección de las células apoptóticas.

El kit de detección de IHC mediante ensayos colorimétricos tipo TUNEL se ha optimizado y contiene todos los reactivos necesarios para la detección de células apoptóticas en muestras de tejido o células. Los reactivos que se incluyen en este kit se pueden usar para probar 50 muestras y se pueden configurar para probar desde 1 hasta 50 muestras a la vez.