TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli (Supply Center Packaging)

Los kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación proporcionan una estrategia de clonación de gran eficacia, de 5 minutos y de un solo paso («clonación TOPO™») para la inserción directa de productos de la polimerasa (PCR) amplificados con polimerasa Taq en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™ 4-TOPO™ TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven menos secuencia de vector y más secuencia de inserto en cada reacción, y están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija. Este producto viene envasado en un embalaje de centro de suministros, que incluye una caja exterior adicional que contiene tanto la caja de vectores TOPO™ como la caja de células competentes. Este embalaje especial ayuda a garantizar que los visitantes de un centro de suministros obtengan el kit completo.

Características de los kits de clonación TOPO™ TA Cloning™ para la secuenciación:

• Obtenga más secuencia—permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar.
• Rápido y sencillo—de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación.
• Eficiente—obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto adecuado.
• Demostrado—rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas

Descripción general de los kits TOPO™ TA Cloning™—para secuenciación

Vector: vector pCR™4-TOPO™ TA—vector de clonación optimizado para obtener mejores resultados de secuenciación

Método de clonación: TOPO™ TA Cloning™: ligación en 5 minutos con base de Topoisomerasa I de productos PCR con salientes 3´A (amplificados con Taq) al vector

Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga o competentes de rápido crecimiento, o los suyos propios.

Vector pCR™4-TOPO™ TA: optimizado para secuenciación
Hemos eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR™4-TOPO™ TA para acortar la distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4-TOPO™ TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.

Manipulación y selección de clones de pCR™4-TOPO™ TA
El vector TA pCR™4-TOPO™ TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y detección azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO™
Mediante la tecnología de clonación TOPO™, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli proporcionadas.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4-TOPO™ TA utilizado en este kit se suministra con salientes 3´T para una ligación eficaz de los productos PCR amplificados con Taq, que contienen salientes 3´A.

El estándar en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Kits TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación: opciones de kits
El kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:

• Clonación general: TOP10 (n.º de K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonación de gran eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4580-01, K4580-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K4595-01, K4595-40)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K4530-20)
• Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de de cat. 450030)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de de cat. K4575-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.

Enlaces relacionados

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• Guía de selección de kits de purificación de ADN plasmídico
• Reactivos, instrumentos y suministros de PCR