Los cartuchos de cromatografía de estreptavidina de alta capacidad Thermo Scientific™ PierceTM son dispositivos cómodos y listos para su uso que permiten separar moléculas biotiniladas de moléculas no biotiniladas y purificar antígenos utilizando anticuerpos biotinilados. Los cartuchos de cromatografía contienen una resina en gránulos de proteína de estreptavidina recombinante inmovilizada que une proteínas biotiniladas a más de 10 mg/ml de gránulos. Esto se corresponde con una capacidad de unión a la biotina entre 2 y 3 veces superior a la de los productos de otros proveedores, y es ideal cuando se requiere un alto grado de recuperación.

Estos cartuchos permiten separaciones cromatográficas rápidas, fáciles y reproducibles, y son compatibles con los principales sistemas de cromatografía líquida automatizada, así como con el procesamiento manual de jeringas (consulte la Tabla 1 para conocer las propiedades generales de los cartuchos). Los cartuchos se conectan directamente a los sistemas ÄKTATM o FPLC sin conectores adicionales. El paquete de accesorios incluido sirve para ajustar con facilidad los cartuchos con conectores de jeringa Luer-LokTM o tubos de 1/16'. Estos cartuchos se pueden regenerar varias veces para utilizarlos en la purificación por afinidad.

Características de la estreptavidina agarosa de alta capacidad:
• Estreptavidina: proteína de estreptavidina recombinante purificada (53 kDa, pI casi neutro); tetramérico con cuatro sitios de unión de biotina por molécula.
• Resina de agarosa: el soporte agarosa granulada entrecruzada al 6 % (CL-6B), la resina más popular para los métodos de purificación por afinidad de proteínas.
• Inerte y estable: la estreptavidina se inmoviliza mediante uniones covalentes, sin cargas y resistentes a la lixiviación, lo que produce una unión inespecífica y permite múltiples usos sin disminuir el rendimiento.
• Alta capacidad: esta variedad de gránulos tiene una carga densa de estreptavidina inmovilizada, lo que ofrece una capacidad de unión superior a 10 mg de BSA biotinilada por ml de resina.
• Dos formatos: disponible en varios frascos de pulpa de resina de varios tamaños o envasada en cartuchos de cromatografía de 1 ml y 5 ml.

Propiedades de la agarosa en gránulos entrecruzada al 6 % (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10 000 a 4 000 000 daltons
• Caudal máximo recomendado: 4 ml/minuto (en una columna de 1 ml) y 5 ml/min (en una columna de 5 ml)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: de 0,3 MPa, 43,5 psi o 3 bar

Los cartuchos de cromatografía de estreptavidina de alta capacidad Pierce constan de estreptavidina recombinante purificada que se ha inmovilizado covalentemente a alta densidad en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de alta calidad. Los anticuerpos biotinilados, las proteínas, los péptidos, los ácidos nucleicos y otras moléculas o complejos de interacción se pueden capturar, inmunoprecipitar, eliminar o purificar a partir de muestras utilizando esta resina de estreptavidina.

La estreptavidina es una proteína tetramérica que contiene cuatro sitios de unión de biotina, de forma similar a la avidina. La proteína nativa de Streptomyces avidinii no posee carbohidratos, tiene un pI acídico de 5,5 y una masa de 75 kDa. La proteína recombinante empleada para la fabricación de resinas de estreptavidina Pierce tiene un punto isoeléctrico casi neutro y una masa de 53 kDa. Por lo general, la estreptavidina tiene una unión no específica menor que la avidina (procedente de la clara de huevo) debido a la ausencia de carbohidratos.

Para obtener más información, consulte: Cartuchos de cromatografía para desalinización y purificación por afinidad