La expresión de baculovirus Bac-to-Bac es un método eficaz para producir baculovirus para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. Se basa en la generación de virus recombinante por la transposición específica del sitio en E. coli en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. El sistema de expresión pFastBac HBM TOPO incluye:

• Expresión de proteínas secretadas: el vector Bac-to-Bac HBM TOPO contiene la señal de secreción de melitina de abeja (HBM) para permitir la expresión de proteínas secretadas. Debido a que las glicoproteínas no pueden ser glicosiladas en ausencia de una señal de secreción, este vector se recomienda para la expresión de glicoproteínas.

• Flexibilidad: el vector Bac-to-Bac HBM TOPO contiene una etiqueta His con extremo C-terminal con un sitio de escisión TEV para facilitar la purificación de proteínas etiquetadas con His con resinas quelantes de níquel (como el sistema de purificación Invitrogen ProBond) y la generación de proteínas nativas con la ayuda de la proteasa Invitrogen AcTEV.

• Clonación rápida y fácil detección: la tecnología de clonación Blunt TOPO permite la clonación de productos de PCR de extremo romo en el vector pFastBac TOPO en cinco minutos. Además, el kit de expresión pFastBac TOPO se suministra con E. coli Mach1-T1R que permite la visualización de colonias ocho horas después de la exposición en placas selectivas de ampicilina debido a su tiempo de duplicación más rápido en comparación con otras cepas de clonación estándar. Obtenga más información sobre las ventajas de la clonación TOPO ›

• Alta eficacia de transfección con el reactivo de transfección ExpiFectamine SF: los kits de expresión TOPO Bac-to-Bac ahora incluyen la última generación de reactivos de transfección ExpiFectamine SF para una transfección de ADN eficaz en células de insectos mediante protocolos rápidos y flexibles. Obtenga más información sobre este reactivo ›

• Bacmid de expresión que ahorra tiempo: con el sistema Bac-to-Bac, el casete de expresión del vector pFastBac se recombina con el bacmid precursor en las células competentes de E. coli DH10Bac para formar un bacmid de expresión. A continuación, el bacmid se transfecta en células de insectos para producir partículas recombinantes de baculovirus.

• Fácil detección de colonias: el bacmid en la E. coli DH10Bac contiene un segmento del gen lacZa. El gen lacZa se interrumpe tras la transposición del casete de expresión en el bacilo, lo que permite la selección azul/blanca de recombinantes para facilitar la identificación de colonias recombinantes.

• Alta expresión de proteínas: el vector pFastBac utiliza el potente promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Sf21 y células High Five.