El kit de ensayo de citometría de flujo Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 647 proporciona un ensayo simplificado y más sólido para analizar la replicación de ADN en las células proliferantes en comparación con los métodos de BrdU tradicionales. El ADN recién sintetizado se analiza mediante el láser de 633/5 nm del citómetro de flujo.

• Exacto--Resultados superiores comparado con los ensayos BrdU
• Rápido--Resultados en tan solo 90 minutos
• Económico--Más ensayos por kit

Ver la guía de selección para todos los ensayos Click-iT™ EdU y Click-iT™ Plus EdU para citometría de flujo.

Un método avanzado que le da resultados superiores a BrdU
el método más preciso de análisis de proliferación es la medición directa de la síntesis de ADN. Originalmente, este procedimiento se realizaba mediante la incorporación de nucleósidos radiactivos, es decir, 3H-timidina. Este método fue reemplazado por la detección basada en anticuerpos del análogo nucleósido bromodesoxiuridina (BrdU). Los kits de ensayo de citrometría de flujo Click-iT™ EdU son una novedosa alternativa al ensayo de BrdU. EdU (5-etinil-2´-desoxiuridina) es un análogo de la timidina que se incorpora al ADN durante la síntesis de ADN activa. La detección se basa en la química de clic: una reacción covalente catalizada con cobre entre una azida y un alqueno. En esta aplicación, el alqueno se encuentra en la fracción de etinil de EdU, mientras que la azida se acopla a los tintes Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 o Pacific BlueTM. Se utilizan métodos de citometría de flujo estándar para determinar el porcentaje de células de fase S en la población (Fig. 1).

Unas condiciones moderadas permiten el uso con tintes de ciclo celular y anticuerpos.
Las ventajas del etiquetado Click-iT™ EdU resultan fácilmente evidentes durante la realización del ensayo (Fig. 2). El pequeño tamaño de la azida del tinte permite la detección eficaz de los EdU incorporados utilizando condiciones moderadas, mientras que la fijación basada en aldehído estándar y la permeabilización de detergente son suficientes para que el reactivo de detección Click-iT™ obtenga acceso al ADN. Esto ocurre de manera diferente en los ensayos de BrdU donde se requiere la desnaturalización del ADN (mediante HCl, calor o digestión con ADNasa) para exponer la BrdU de forma que pueda detectarla un anticuerpo anti-BrdU. El procesamiento de las muestras para el ensayo de BrdU puede provocar una alteración de la señal de la distribución del ciclo celular, además de la destrucción de los sitios de reconocimiento de los antígenos cuando se utilice el método HCl. Por el contrario, el kit de proliferación de células EdU listo para su uso es compatible con tintes de ciclo celular. Este kit de ensayo EdU también se puede multiplexar con anticuerpos contra marcadores de superficie e intracelulares.

Protocolo rápido y sencillo
El protocolo Click-iT™ EdU se basa en los pasos de fijación mediante aldehído y permeabilización de detergente para el etiquetado de anticuerpos inmunohistoquímicos, pero EdU es compatible con
otros agentes de fijación/permeabilización, incluyendo la saponina y el metanol. En tan solo cinco pasos podrá empezar a analizar sus datos de proliferación celular:

• Tratar las células con EdUM
• Reparar y permeabilizar las células
•Detectar las células en fase S con el cóctel de detección Click-iT™ durante 30 minutos
• Lavar una vez
• Analizar

Consiga resultados exactos de manera económica
Al aumentar el número de ensayos por kit, el kit de ensayo de citometría de flujo Click-IT™ EdU Alexa Fluor™ 647 es más barato que los ensayos BrdU tradicionales, por lo que es la opción ideal para experimentos grandes.

Solo para uso en investigación. No diseñado para uso diagnóstico o terapéutico en humanos ni en animales.