Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect est optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin directement à partir d’un lysat de cellules de mammifères sans avoir besoin d’isoler l’ARN au préalable. La lyse cellulaire et la transcription inverse sont effectuées dans le même tube et l’ADNc premier brin qui en résulte est prêt à être utilisé en PCR et en qPCR.

Caractéristiques du kit SuperScript IV :
• Compatible avec une large gamme de types de cellules de mammifères cultivés dans différentes conditions de traitement
• Le format à tube unique minimise la perte de réactifs, la perte d’échantillons et le temps de manipulation
• Le volume total de lysat peut être utilisé dans la réaction de synthèse d’ADNc premier brin, fournissant des rendements plus élevés avec un nombre limité de cellules et permettant la détection de transcrits rares
• ADNc de haute qualité généré pour une utilisation dans une variété d’applications, notamment la PCR et la qPCR
• Le protocole simple dure environ 37 minutes
• Compatible avec les Master Mix TaqMan et SYBR Green qPCR de différents fabricants
• Des performances optimisées pour 1 à 10 000 cellules par échantillon, des résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié

Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect comprend la transcriptase inverse SuperScript IV. Les caractéristiques de cette enzyme comprennent :
• Réduction de l’activité de la RNase H
• Meilleure stabilité thermique
• Rendements élevés d’ADNc dans la réaction de synthèse premier brin, pour une plus grande sensibilité et une meilleure détection des transcrits rares
• Une tolérance supérieure à divers inhibiteurs de la RT

La transcriptase inverse SuperScript IV est un choix privilégié pour toutes les applications de RT-PCR et de qRT-PCR. Il s’agit d’un mutant exclusif du virus de la leucémie murine de Moloney (M-MLV) avec une robustesse et une fiabilité élevées dans les réactions de transcription inverse. Il est significativement amélioré par rapport à la transcriptase inverse SuperScript III dans la résistance aux inhibiteurs, une processivité et une vitesse de réaction, tout en conservant tous les avantages de l’enzyme précédent, notamment une thermostabilité supérieure, une synthèse d’ADNc pleine longueur très efficace et une activité ARNase réduite.

Fonctionnement
Dans la RT-PCR traditionnelle, l’ARN est d’abord isolé des cellules dans une procédure chronophage qui peut entraîner une perte de matériau. Grâce au kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect, les cellules sont lysées et l’ADNc est généré à partir du lysat dans un tube unique avec une manipulation minimale et aucune perte d’échantillon. Le traitement par DNase I est une étape facultative qui peut être utilisée pour éliminer l’ADN génomique avant la synthèse premier brin. Ce kit a été optimisé pour les échantillons de petites cellules, allant de 10 000 cellules à une seule cellule.