SuperScript™ IV CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit
Invitrogen™

SuperScript™ IV CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit

Optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin directement à partir d’un lysat de cellules de mammifères sans avoir besoin d’isoler l’ARN au préalable. La lyse cellulaire et la transcription inverse sont effectuées dans le même tube et l’ADNc premier brin qui en résulte est prêt à être utilisé dans le clonage, la PCR et la qPCR.
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RéférenceNbre de réactions
1175015050 réactions
11750350500 réactions
Référence 11750150
Prix (EUR)
718,00
Each
Nbre de réactions:
50 réactions
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
718,00
Each
Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect est optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin directement à partir d’un lysat de cellules de mammifères sans avoir besoin d’isoler l’ARN au préalable. La lyse cellulaire et la transcription inverse sont effectuées dans le même tube et l’ADNc premier brin qui en résulte est prêt à être utilisé en PCR et en qPCR.

Caractéristiques du kit SuperScript IV :
• Compatible avec une large gamme de types de cellules de mammifères cultivés dans différentes conditions de traitement
• Le format à tube unique minimise la perte de réactifs, la perte d’échantillons et le temps de manipulation
• Le volume total de lysat peut être utilisé dans la réaction de synthèse d’ADNc premier brin, fournissant des rendements plus élevés avec un nombre limité de cellules et permettant la détection de transcrits rares
• ADNc de haute qualité généré pour une utilisation dans une variété d’applications, notamment la PCR et la qPCR
• Le protocole simple dure environ 37 minutes
• Compatible avec les Master Mix TaqMan et SYBR Green qPCR de différents fabricants
• Des performances optimisées pour 1 à 10 000 cellules par échantillon, des résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié

Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect comprend la transcriptase inverse SuperScript IV. Les caractéristiques de cette enzyme comprennent :
• Réduction de l’activité de la RNase H
• Meilleure stabilité thermique
• Rendements élevés d’ADNc dans la réaction de synthèse premier brin, pour une plus grande sensibilité et une meilleure détection des transcrits rares
• Une tolérance supérieure à divers inhibiteurs de la RT

La transcriptase inverse SuperScript IV est un choix privilégié pour toutes les applications de RT-PCR et de qRT-PCR. Il s’agit d’un mutant exclusif du virus de la leucémie murine de Moloney (M-MLV) avec une robustesse et une fiabilité élevées dans les réactions de transcription inverse. Il est significativement amélioré par rapport à la transcriptase inverse SuperScript III dans la résistance aux inhibiteurs, une processivité et une vitesse de réaction, tout en conservant tous les avantages de l’enzyme précédent, notamment une thermostabilité supérieure, une synthèse d’ADNc pleine longueur très efficace et une activité ARNase réduite.

Fonctionnement
Dans la RT-PCR traditionnelle, l’ARN est d’abord isolé des cellules dans une procédure chronophage qui peut entraîner une perte de matériau. Grâce au kit de synthèse d’ADNc SuperScript IV CellsDirect, les cellules sont lysées et l’ADNc est généré à partir du lysat dans un tube unique avec une manipulation minimale et aucune perte d’échantillon. Le traitement par DNase I est une étape facultative qui peut être utilisée pour éliminer l’ADN génomique avant la synthèse premier brin. Ce kit a été optimisé pour les échantillons de petites cellules, allant de 10 000 cellules à une seule cellule.

Spécifications
Type de produit finalADNc premier brin
FormatKit
Nbre de réactions50 réactions
Température de réaction optimale50°C
Quantité50 réactions
Format de réactionComposants prémélangés
Type de réactifTranscription inverse
Transcriptase inverseSuperScript IV
Activité de la ribonucléase HRéduction
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Matériau de départCellules
TechniqueTranscription inverse
À utiliser avec (application)PCR en temps réel, PCR en temps réel (qPCR)
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réaction10 min
Unit SizeEach
Contenu et stockage
• Solution de lyse SuperScript IV CellsDirect (2 x 1,25 ml)
• Solution d’arrêt SuperScript IV CellsDirect (1 x 250 µl)
• Activateur de lyse (1 x 25 µl)
• DNase (1 x 55 µl)
• Master Mix pour RT SuperScript IV (1 x 400 µl)
• Contrôle sans RT SuperScript IV (1 x 400 µl)

Conserver à –20°C.

Foire aux questions (FAQ)

What are the RT primers included in the SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit (Cat. No. 11750150, 11750350)?

The RT master mix contains both random and oligo dT primers.

What primers come in the SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit (Cat. No. 11750150)? Is it Oligo(dT) primers or random hexamers?

It is both. The RT master mix includes both, random hexamers and Oligo(dT) primers.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix. The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.