Système SuperMix de synthèse premier brin SuperScript™ III pour qRT-PCR

Le système SuperScript™ III premier brin pour qRT-PCR SuperMix offre toutes les caractéristiques de la transcriptase inverse SuperScript™ III en matière de capacités haute température dans un format SuperMix optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin, à des fins d’utilisation dans le cadre d’une RT-PCR quantitative (qRT-PCR) en temps réel. La configuration de réaction simple et qui permet un gain de temps n’utilise que deux tubes : un mélange Reaction Mix 2X et un mélange enzymatique.

Mélange enzymatique
La transcriptase inverse SuperScript™ III, incluse dans le mélange enzymatique RT, est une version de RT M-MLV conçue pour réduire l’activité de la RNase H et accroître la stabilité thermique. L’enzyme peut être utilisée pour synthétiser l’ADNc à des températures s’échelonnant entre 42 et 60°C, offrant une meilleure spécificité, des rendements d’ADNc supérieurs et davantage de produit pleine longueur que d’autres transcriptases inverses. Dans la mesure où la SuperScript™ III RT n’est pas inhibée sensiblement par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, elle peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc à partir de l’ARN total. L’inhibiteur de ribonucléase recombinant RNaseOUT™, également inclus dans le mélange enzymatique, est une protéine bloquant la RNase qui assure une protection contre la dégradation de l’ARN cible due à la contamination de la ribonucléase de la préparation de l’ARN.

Mélange Reaction Mix
Le mélange Reaction Mix 2X RT comporte de l’oligo(dT)₂₀, des hexamères aléatoires, du MgCl₂ ainsi que des dNTP dans une formulation tampon optimisée pour la qRT-PCR. E. coli RNAse H est fourni sous la forme d’un tube distinct au sein du kit en vue d’éliminer le modèle d’ARN de la molécule hybride d’ARN de l’ADNc après synthèse premier brin. Cette approche augmente la sensibilité dans le cadre de la qRT-PCR

Utilisation du système SuperMix de synthèse premier brin SuperScript™ III
Cette formulation SuperMix peut être utilisée pour quantifier moins de 10 copies d’un gène cible dans le cadre d’une qRT-PCR, avec une vaste échelle dynamique permettant la quantification précise des ARNm en forte concentration à partir d’un volume maximal de 1 µg d’ARN total. Des réactifs spécifiés pour 50 ou 250 réactions de transcription inverse de 20 µl chacun sont fournis.