Enzyme ezDNase™
Invitrogen™

Enzyme ezDNase™

L’enzyme Invitrogen™ ezDNase™ est une DNase recombinante double brin spécifique pour l’élimination rapide de l’ADN génomique contaminant des préparations d’ARN.Afficher plus
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RéférenceQuantité
1176605150 μl
Référence 11766051
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Quantité:
50 μl
Grand volume ou format personnalisé
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L’enzyme Invitrogen™ ezDNase™ est une DNase recombinante double brin spécifique pour l’élimination rapide de l’ADN génomique contaminant des préparations d’ARN. Il clive les liaisons phosphodiester dans l’ADN double brin pour obtenir 2 à 8 bp d’oligonucléotides avec des extrémités 5’-phosphate et 3’-hydroxyle.

Les caractéristiques de l’enzyme ezDNase sont les suivantes :
• Élimination efficace et rapide de l’ADN génomique
•—Très spécifique : aucun impact sur l’ARN, l’ADNc ou les amorces dans les réactions RT

La haute spécificité de l’enzyme ezDNase pour l’ADN double brin permet l’élimination efficace et rapide de l’ADN génomique sans réduction de la qualité ou de la quantité d’ARN ou d’ADN simple brin présents dans la réaction telle que l’ADNc et les amorces. L’enzyme ezDNase est thermo-labile et peut donc être facilement désactivée par le traitement thermique à température modérée (55°C). Ces caractéristiques font de l’ezDNase un choix supérieur pour l’élimination de l’ADN génomique avant les réactions de transcription inverse.

Lorsqu’il est utilisé en association avec le mélange SuperScript™ IV VILO™ Master Mix ou d’autres réactifs de transcription inverse Invitrogen, l’enzyme ezDNase aide à réduire de façon significative la possibilité de compromettre la synthèse d’ADNc par l’ADN génomique et de réduire la variation dans la quantification RT-qPCR provoquée par la perte ou les dommages d’ARN pendant le traitement par DNase classique.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Tampon compatibleRéactifs de transcription inverse
À utiliser avec (application)RT-qPCR
Type de produitEnzymes
Quantité50 μl
Type d’échantillonARN
Conditions d’expéditionSous glace sèche
Concentration10X
EnzymesDNase
FormeLiquide
Gamme de produitsezDNase
Unit SizeEach
Contenu et stockage
• 50 μl d’enzyme ezDNase
• 100 μl de tampon ezDNase (10X)
• 1,25 ml d’eau exempte de nucléase

Conserver entre -5 et -30°C.

Foire aux questions (FAQ)

How can I quantify the ssDNA in samples that contain both ssDNA and dsDNA, using the Qubit ssDNA Assay Kit (Cat. No. Q10212)?

Unfortunately, it is not possible to efficiently measure the ssDNA content in a sample that also contains dsDNA with the Qubit ssDNA Assay Kit (Cat. No. Q10212). The dye in the Qubit ssDNA Assay kit binds to both ssDNA and dsDNA.

It is possible to treat the sample with a DNase that only degrades dsDNA, such as theezDNase Enzyme (Cat. No. 11766051), and measure the ssDNA concentration afterward. However, if all dsDNA is not successfully digested, there is a risk of overestimating the ssDNA content.

The following article describes a PCR-based method to detect ssDNA in dsDNA samples:

Quantitative amplification of single-stranded DNA (QAOS) demonstrates that cdc13-1 mutants generate ssDNA in a telomere to centromere direction

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Does the TaqMan Cells-to-CT Express Kit contain reagents for the removal of genomic DNA (gDNA)?

Yes, the TaqMan Cells-to-CT Express Kit includes Express ezDNase which can be added to the Express Lysis Solution for removal of gDNA during cell lysis. Express ezDNase is a double-strand specific, heat-labile DNase that will only digest gDNA, making it compatible with the downstream reverse transcription reaction. The enzyme is automatically inactivated during a heat kill step included in the reverse transcription program. To avoid the detection of gDNA, we recommend using a TaqMan Gene Expression Assay specifically designed to span an intron-exon boundary. Such assays are designated with an "_m1" suffix. More information can be found here.

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In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix. The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.