BaculoDirect™ C-Term Transfection Kit

Le système d’expression baculovirus BaculoDirect™ est un système eucaryotique puissant et polyvalent pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. La combinaison de la technologie Gateway™ et de l’expression baculovirus fait du système BaculoDirect la méthode la plus rapide et la plus simple pour la production de baculovirus recombinant.

Fonctionnement
BaculoDirect™ L’ADN linéaire (génome du baculovirus) est conçu pour inclure des sites attR pour une recombinaison rapide et efficace avec un clone d’entrée Gateway. Le gène d’intérêt est recombiné à partir du clone d’entrée dans l’ADN linéaire BaculoDirect à l’aide d’une réaction LR simple d’une heure (figure 1). Le Reaction Mix qui en résulte contient le baculovirus recombinant portant le gène d’intérêt et est utilisé pour transfecter des cellules d’insectes. La nécessité de transformer les bactéries et d’isoler un grand bacmide ou de co-transfecter un vecteur de transfert et l’ADN de baculovirus linéaire en cellules d’insectes est éliminée. Par conséquent, le temps de manipulation est considérablement réduit. Le baculovirus purifié peut être isolé en moins d’une semaine.

L’ADN linéaire Gateway
BaculoDirect est conçu pour un clonage rapide avec un clone d’entrée Gateway et une expression ultérieure dans les cellules d’insectes Sf9 ou Sf21. Caractéristiques de l’ADN linéaire :

• Promoteur de polyédrine fort pour l’expression de haut niveau
• Les sites R pour une recombinaison efficace avec tout vecteur d’entrée Gateway flanqué d’attL
• Gène TK pour une sélection négative à l’aide de ganciclovir
• “Tag” V5 C-terminal (kit d’expression à terme C BaculoDirect™) ou “tag” V5-His d’extrémité N-terminale (kit d’expression à terme BaculoDirect™) Pour la détection avec l’anticorps anti-V5 et la purification avec la résine de chélation du nickel
• Le site de clivage de la protéase TEV pour l’élimination du “tag” V5-His après purification (kit d’expression à terme N BaculoDirect)
• Gène LacZ, afin de garantir la génération d’un stock pur de baculovirus, qui est remplacé par votre gène d’intérêt après la réaction recombinante LR

Autres matériaux requis, disponibles séparément : Clone d’entrée Gateway.

Vous trouverez un guide de sélection pour choisir le vecteur d’entrée Gateway le plus approprié pour votre application à l’adresse suivante : www.thermofisher.com/Gateway.