Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit
Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit

Le kit de dosage luminescent de la luciférase Gaussia Pierce Thermo Scientific offre un signal de bioluminescence extrêmement lumineux etAfficher plus
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Le kit de dosage luminescent de la luciférase Gaussia Pierce Thermo Scientific offre un signal de bioluminescence extrêmement lumineux et stable (demi-vie supérieure à une heure), notamment en présence d’un rapporteur pour la luciférase Gaussia-Dura.

Caractéristiques du kit de dosage luminescent de la luciférase Gaussia :

Sensible—détection hautement sensible de l’activité de la luciférase Gaussia
Stable—stabilité accrue du signal
Simple—ne nécessite pas de luminomètre avec injecteurs
Compatible—réactifs de dosage compatibles avec d’autres luciférases Gaussia
Compatible avec l’automatisation—capable de réaliser des dosages à haut débit
Pratique—contient un tampon de lyse cellulaire universel et un réactif de dosage lumineux optimisé
Sûr—permet d’effectuer des dosages non radioactifs

Ce kit de dosage luminescent de la luciférase Pierce contient des réactifs pour mesurer l’activité de la luciférase Gaussia dans les milieux de culture cellulaire et les lysats de mammifères. Lorsqu’il est utilisé avec les plasmides de luc. Gaussia-Dura Thermo Scientific, le kit fournit un système de dosage de rapporteur bioluminescent extrêmement sensible pour la détection sécrétée ou intracellulaire de l’activité de la luciférase avec un stabilité accrue du signal. La sortie lumineuse générée par la réaction de luciférase peut être corrélée avec la quantité de protéine de luciférase produite qui est à son tour proportionnelle à l’activité du promoteur conduisant à l’expression de luciférase. Le kit peut être utilisé pour détecter l’activité de toutes luciférases Gaussia ou dérivés qui utilisent la coelentérazine comme substrat.

Comprend :
tampon de lyse cellulaire, tampon de réaction et substrat

Nécessite :
Luciférase Gaussia et luminomètre ou tout autre instrument capable de surveiller la luminescence, tels que les lecteurs de microplaques Luminoskan Ascent et Varioskan Flash de Thermo Scientific.

Applications :
• Études de promoteurs pour l’analyse des éléments de régulation cis et des facteurs d’action trans
• Sélection de médicaments
• Sélection de siARN et de miARN
• Dosages multiplexés pour l’étude des effets hors-cible
• Dosages de rapporteurs pour la localisation de voie de sécrétion / protéines
• Analyse de voies de transduction de signaux
• Études d’épissage d’ARN

La luciférase Gaussia est une protéine de 20 kDa provenant du copépode marin, Gaussia princeps. L’enzyme bioluminescente est hautement sécrétée dans le milieu de culture cellulaire, ce qui permet la surveillance cellulaire de l’activité du rapporteur. Le rendement lumineux généré par la réaction de luciférase peut être corrélé à la quantité de protéine de luciférase Gaussia produite et utilisée pour déterminer l’activité du promoteur dirigeant l’expression de la Gaussia. Le signal produit par la luciférase Gaussia affiche une cinétique incandescente forte et est considérablement supérieur aux signaux incandescents provenant de luciférases soit de lucioles natives soit Renilla, dosées dans des conditions similaires.

Le gène Gaussia-Dura utilisé dans les vecteurs de Luc. Gaussia-Dura Thermo Scientific est dérivé du gène sauvage Gaussia et fournit un rendement lumineux égal, mais plus stable. Le réactif du kit de dosage luminescent Gaussia produit une réaction de luciférase Gaussia-Dura avec cinétique de type luminescente et est recommandé pour les luminomètres sans injecteurs ou pour les applications nécessitant un traitement d’échantillons par lots.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications
DoserEnzyme rapporteur, dosage par rapporteur de luciférase
Cellules compatiblesCellules de mammifères
Méthode de détectionBioluminescent
À utiliser avec (équipement)Luminomètre (microplaque)
FormatPlaque à 384 puits, plaque à 96 puits
Type d’étiquetteMarquage enzymatique
Gamme de produitsPierce
Quantité100 réactions
SubstratCoélentérazine
Propriétés du substratSubstrat chimique
Type de substratSubstrat de luciférase
Suffisant pour100 dosages de luciférase
CibleLuciférase, luciférase gaussia
TechniqueChimiluminescence améliorée
AccélérateurEF-1α
TypeKit d’essai
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Suffisant pour : 100 dosages de luciférase dans des puits de microplaques
• Tampon de dosage luminescent Gaussia, 5 ml (stocker à 4°C)
• 100 X coelentérazine, 50 µl (stocker à -80°C)
• Tampon de lyse cellulaire de luciférase (2X), 6 ml (stocker à température ambiante)

Le kit peut être stocké à -80°C ou individuellement aux températures indiquées.

Foire aux questions (FAQ)

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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