Pierce™ Firefly Luciferase Flash Assay Kit
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Thermo Scientific™

Pierce™ Firefly Luciferase Flash Assay Kit

Le kit de dosage incandescent de luciférase de luciole Pierce Thermo Scientific fournit des réactifs pour mesurer l’activité luciférase rougeAfficher plus
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16174Kit de 100 réactions
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Le kit de dosage incandescent de luciférase de luciole Pierce Thermo Scientific fournit des réactifs pour mesurer l’activité luciférase rouge dans les cellules entières, produisant un signal flash très fort qui se décompose rapidement.

Caractéristiques du kit de dosage incandescent de la luciférase de luciole :

• Détection hautement sensible de l’activité de la luciférase de luciole
• Utiliser avec l’amplificateur de signal de luciférase de luciole Pierce (signal maximum)
• Solution de travail stable jusqu’à 2 mois à -20°C
• Réactifs de dosage compatibles avec d’autres luciférases de luciole
• Automatisable
• Contient un tampon de lyse cellulaire universel et un réactif de dosage lumineux optimisé
• Dosage non radioactif sûr

Ce kit de dosage incandescent de luciférase de luciole Pierce Thermo Scientific contient des réactifs permettant de mesurer l’activité de la luciférase de luciole dans les lysats cellulaires entiers de mammifères. Contenant un tampon de lyse pratique, un tampon de dosage et un substrat de luciole, ce kit fournit un système complet de réactifs pour la détection intracellulaire de l’activité du promoteur ou de la voie. Le rendement lumineux résultant de la réaction de luciférase est capté à l’aide d’un luminomètre et peut être corrélé avec la quantité de protéine luciférase de luciole produite et utilisée pour déterminer l’activité du promoteur dirigeant l’expression de la luciole. Ces réactifs sont optimisés pour fonctionner avec les plasmides de Luc de luciole Thermo Scientific ; cependant, ce kit de dosage incandescent peut être utilisé pour détecter l’activité d’autres luciférases dépendantes de l’ATP ou de luciole qui utilisent la D-luciférine comme substrat.

Comprend :
Tampon de lyse cellulaire, tampon de réaction et substrat ; acheter l’amplificateur de signal de luciférase séparément.

Nécessite :
• Luciférase de luciole et luminomètre ou tout autre instrument capable de surveiller la luminescence, tels que les lecteurs de microplaques Luminoskan Ascent et Varioskan Flash de Thermo Scientific.
• Pour de meilleurs résultats (signal maximum), utiliser avec l’amplificateur de signal de luciférase de luciole Thermo Scientific Pierce

Applications :
• Études de promoteurs pour l’analyse des éléments de régulation cis et des facteurs d’action trans
• Sélection de médicaments
• Sélection de siARN et de miARN
• Dosages multiplexés pour l’étude des effets hors-cible
• Dosages de rapporteurs pour la localisation de voie de sécrétion / protéines
• Analyse de voies de transduction de signaux
• Études d’épissage d’ARN

La luciférase de luciole est une protéine de 60 kDa produite dans la nature par plusieurs espèces de la famille des Lampyridés qui comprend les genres Photinus et Luciola. Le signal bioluminescent de la luciférase de luciole est issu de l’oxydation de la D-luciférine. Le rendement lumineux capté à l’aide d’un luminomètre peut être corrélé avec la quantité de protéine luciférase de luciole produite et utilisée pour déterminer l’activité du promoteur dirigeant l’expression de la luciole.

Plus d’informations sur les produits
Surveillance de la différenciation neuronale à l’aide de rapporteurs multiplexés de luciférase
Activation de la voie de réponse antioxydante par des produits chimiques pesticides
Luciférase polyvalente : luminomètre pour microplaques et kits de dosage incandescent de la luciférase
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
DoserEnzyme rapporteur, dosage par rapporteur de luciférase
Cellules compatiblesCellules de mammifères
Méthode de détectionBioluminescent
À utiliser avec (équipement)Luminomètre (microplaque)
FormatPlaque à 384 puits, plaque à 96 puits
Type d’étiquetteMarquage enzymatique
Gamme de produitsPierce
QuantitéKit de 100 réactions
SubstratD-luciférine
Propriétés du substratSubstrat chimique
Type de substratSubstrat de luciférase
CibleLuciférase, luciférase de luciole
TechniqueChimiluminescence améliorée
TypeKit d’essai
Unit SizeEach
Contenu et stockage
• Tampon de dosage incandescent de luciole, 5 ml, stocker à 4°C
• D-luciférine, lyophilisée, 3 mg, stocker à 4°C
• 2X tampon de lyse cellulaire, 6 ml, stocker à température ambiante

Dès réception, stocker le kit à 4°C ou stocker individuellement chaque composant à la température indiquée ci-dessus.

Foire aux questions (FAQ)

I got a high background signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. Why is this?

This could be due to contamination of the control sample. Make sure to use new sample and change pipette tips after each well.

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I got a high signal with a Firefly Luciferase Glow/Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample 
    Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay



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    What could be causing no signal or low signal with the Firefly Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Do you have any suggestions to get around this problem?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - D-luciferin auto-oxidized: Protect substrate from light and maintain 100X D-luciferin at -20 degrees C; Prepare new Working Solution if used longer than 4 hours.
    - Low luciferase expression: Use Pierce Firefly Signal Enhancer (100X) (Cat. No. 16180); Lyse cells in a smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Degraded luciferase protein: Store cell lysates on ice and perform assays immediately following cell lysis.

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    I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
    - Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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    I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

    This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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