Pierce™ Gaussia-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

Le kit de double dosage de luciférase Gaussia-luciole Pierce Thermo Scientific fournit les réactifs nécessaires pour détecter simultanément l’activité intracellulaire de la luciférase Gaussia et de luciole rouge dans les lysats de cellules entières de mammifères.

Caractéristiques du kit de double dosage de luciférase Gaussia-luciole :

• Simultanée—détection simultanée, basée sur un filtre et séparée en longueur d’onde de deux activités de luciférase
• Sensible—mesure les activités de la luciférase Gaussia bleu vif et de luciole rouge dans le même échantillon
• Rapide—pas d’étape d’absorption requise, contrairement aux doubles dosages séquentiels traditionnels
• Multiplexage—capable de quantifier deux activités cellulaires dans le(s) même(s) échantillon(s)

Le kit de double dosage de luciférase Gaussia-luciole Pierce est un test hautement sensible qui permet la détection simultanée de l’activité de la luciférase Gaussia et de luciole rouge. La luciférase Gaussia agit comme rapporteur expérimental avec une luciole rouge constitutivement active comme contrôle de normalisation. Comme le montrent les vidéos ci-dessous, cette combinaison rapporteur-contrôle permet la surveillance simultanée des activités du rapporteur expérimental et de la luciférase de contrôle dans un dosage en une lecture sans ajout en deux étapes de réactifs de substrat ou d’absorption. La solution de travail de dosage contient des substrats pour les deux types de luciférases et les réactions se produisent simultanément avec une cinétique de type incandescent. Les signaux luminescents qui en résultent peuvent être résolus de manière spectrale à l’aide de filtres. Dans un seul échantillon, les chercheurs peuvent évaluer l’activité transcriptionnelle des éléments réglementaires, les voies de transduction du signal et les effets des activateurs ou des inhibiteurs.

Comprend :
Tampon de lyse cellulaire, tampon de réaction et substrats coelentérazine et D-luciférine

Nécessite :
Rapporteurs de luciférase Gaussia et de luciole rouge ; Ensembles de filtres dans les plages de 425 à 525 nm pour la luc. Gaussia et 615 à 675 nm pour la luc. de luciole rouge. Luminomètre ou autre instrument capable de surveiller la luminescence, tel que les lecteurs de microplaques Luminoskan Ascent et Varioskan Flash Thermo Scientific ; Injecteur nécessaire pour évaluer plus de 24 puits à la fois.

Applications :
• Étudier deux éléments réglementaires en même temps
• Surveiller simultanément deux voies de signalisation
• Permettre l’étude de plusieurs cibles par écran (p. ex. effets hors cible)

Vidéos d’application :
La luciférase Gaussia produit un signal bioluminescent plus lumineux que les luciférases Renilla natives et de luciole. Le signal bioluminescent (λmax = 470 nm) produit par la luciférase Gaussia provient de l’oxydation de la coelentérazine. Cette réaction ne nécessite pas d’adénosine triphosphate (ATP) ni d’autres cofacteurs. La luciférase de luciole rouge est une forme mutante de la luciférase de luciole japonaise provenant de la Luciola cruciata. Cette luciférase produit un spectre d’émission décalé vers le rouge (λmax = 613 nm) qui provient de l’oxydation de la D-luciférine en présence d’ATP. Les luciférases de luciole rouge et Gaussia sont utilisées dans le double dosage, car le rendement lumineux peut être résolu de façon spectrale.

Plus d’informations sur le produit
• Dosages hautement sensibles de rapporteurs de la luciférase multiplexe
• Détection simultanée par double émission des dosages de la luciférase
• Activation de la voie de réponse antioxydante par des produits chimiques pesticides