Système de synthèse premier brin SuperScript™ III

Citations et références (7)

Invitrogen™

Système de synthèse premier brin SuperScript™ III

Optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin à partir de poly(A)⁺ purifié, d’ARN total ou de RT-PCR.

Référence	Quantité
18080051	50 rxns

Référence 18080051

Prix (EUR)

908,00

Quantité:

50 rxns

Grand volume ou format personnalisé

Prix (EUR)

908,00

Le système de synthèse premier brin SuperScript™ III pour la RT-PCR est optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de poly(A)⁺ purifié ou d’ARN total. Ce système permet de détecter les cibles d’ARN de 100 bp à >12 kb. La quantité de produit de départ peut aller de 1 pg à 5 µg d’ARN total. La transcriptase inverse SuperScript™ III est une version de RT M-MLV conçue pour réduire l’activité RNAse H et procurer une meilleure stabilité thermique Cette enzyme peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc à des températures allant de 42 à 55°C, offrant une meilleure spécificité, des rendements d’ADNc supérieurs et davantage de produit de pleine longueur que d’autres transcriptases inverses. Comme la RT SuperScript™ III n’est pas significativement inhibée par l’ARN ribosomal et de transfert, elle peut être utilisée pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir d’une préparation d’ARN total.

Utilisation du système SuperScript™ III premier brin
La synthèse d’ADNc est effectuée dans un premier temps avec de l’ARN total ou de l’ARN sélectionné par poly(A)⁺ amorcé avec de l’oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce génétique. Dans un deuxième temps, la PCR est effectuée dans un tube distinct à l’aide d’amorces propres au gène d’intérêt. Pour la réaction de PCR, nous recommandons l’un des ADN polymérases suivants : L’ADN polymérase Platinum™ Taq offre des conditions d’activation à chaud automatique pour une spécificité accrue allant jusqu’à 4 kb, l’ADN polymérase Platinum™ Taq haute-fidélité offre un rendement accru et une haute fidélité pour des cibles allant jusqu’à 15 kb, et l’ADN polymérase Platinum™ Pfx offre une fidélité maximale pour des cibles allant jusqu’à 12 kb.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Type de produit finalADNc premier brin

FormatKit

Nbre de réactions50 réactions

Température de réaction optimale50°C

Quantité50 rxns

Format de réactionComposants séparés

Type de réactifTranscription inverse

Transcriptase inverseSuperScript III

Conditions d’expéditionGlace carbonique

Matériau de départARN

TechniqueTranscription inverse

À utiliser avec (application)Analyse par biopuces, RT-PCR

GC-Rich PCR PerformanceÉlevé

Vitesse de réaction50 min

Unit SizeEach

Contenu et stockage

• Oligo(dT)₂₀, 50 μl (50 μM)
• Hexamères aléatoires, 250 μl (50 ng/μl)
• Tampon RT 10X, 1 ml
• DTT, 250 μl (0,1 M)
• Chlorure de magnesium, 500 μl (25 mM)
• Mélange de dNTP, 250 μl (10 mM)
• RT SuperScript III, 50 μl (200 U/μl)
• RNaseOUT, 100 μl (40 U/μl)
• RNase H d’E. coli, 50 μl (2 U/μl)
• Eau traitée au DEPC, 1,2 ml
• ARN total HeLa, 20 μl (10 ng/μl)
• Amorce de contrôle sens, 25 μl (10 μM)
• Amorce de contrôle antisens, 25 μl (10 μM)

Conserver à –20°C.

Foire aux questions (FAQ)

I am interested in generating cDNA from total RNA. What is the difference between SuperScript III Reverse Transcriptase and SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR?

SuperScript III Reverse Transcriptase (Cat. Nos. 18080093, 18080044, 18080085) contains the stand-alone enzyme and a vial each of 5X first-strand buffer and 100 mM DTT.

SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR is a complete kit that provides the SuperScript III Reverse Transcriptase and all the other components required for synthesis of first-strand cDNA from total or poly(A)- RNA. It includes:
- Superscript III Reverse Transcriptase
- Oligo (dT)20 Primer
- Random hexamers
- 10X RT buffer
- 25 mM MgCl2
- 0.1 M DTT
- 10 mM dNTP Mix
- RNAseOUT Recombinant Ribonuclease Inhibitor
- E. coli RNAse H
- DEPC-treated water
- Total HeLa RNA control
- Sense control primer
- Anti-sense control primer
Note: The kit does not include the PCR amplification enzyme.

How long can I store the cDNA from my reverse transcription step?

You can store your cDNA at 2-6 degrees C for up to 24 hours. For long-term storage, store the cDNA at -15 to -25 degrees C and add EDTA to a final concentration of 1 mM to prevent degradation.

How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?

We recommend using ezDNase (Cat. No. 11766051). ezDNase Enzyme's high specificity for double-stranded DNA enables efficient and fast genomic DNA removal without reduction in the quality or quantity of RNA. ezDNase Enzyme is heat-labile and so can be easily deactivated by heat treatment at moderate temperature (55 degrees C). These features make ezDNase Enzyme an excellent choice for genomic DNA removal prior to reverse transcription reactions.

How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?

The amount of RNA template for a cDNA synthesis is highly flexible and depends upon the amount of sample available and an individual's need. In general, 1 µg total RNA is used in a typical 20-µL RT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourReverse Transcription and RACE Support Center.

Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?

RNase H treatment is not always necessary. Many PCR reactions work without it. However, for cDNA synthesized with RNase H-deficient reverse transcriptases (like SuperScript II, III, and IV), RNA/cDNA hybrids—especially GC-rich ones—may not denature well, reducing PCR sensitivity. RNase H treatment can help in such cases. Additionally, RNase H treatment is beneficial for cloning larger fragments.

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Citations et références (7)

Citations et références

Abstract

The UL41 protein of herpes simplex virus 1 degrades RNA by endonucleolytic cleavage in absence of other cellular or viral proteins.

Authors:Taddeo B, Zhang W, Roizman B,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:16477041

The herpes simplex virus 1 ORF UL41 encodes a protein (virion host shutoff or vhs) associated with selective degradation of mRNA early in infection. Some mRNAs, exemplified by GAPDH or beta-actin mRNAs, are degraded rapidly. Others, for example IEX-1 mRNA, are degraded in two stages: whereas the 3' domain disappears ... More

Transcriptional profiling of rhesus monkey embryonic stem cells.

Authors:Byrne JA, Mitalipov SM, Clepper L, Wolf DP,

Journal:Biol Reprod

PubMed ID:16943365

Embryonic stem cells (ESCs) may be able to cure or alleviate the symptoms of various degenerative diseases. However, unresolved issues regarding survival, functionality, and tumor formation mean a prudent approach should be adopted towards advancing ESCs into human clinical trials. The rhesus monkey provides an ideal model organism for developing ... More

Novel GC-rich DNA-binding compound produced by a genetically engineered mutant of the mithramycin producer Streptomyces argillaceus exhibits improved transcriptional repressor activity: implications for cancer therapy.

Authors:Albertini V, Jain A, Vignati S, Napoli S, Rinaldi A, Kwee I, Nur-e-Alam M, Bergant J, Bertoni F, Carbone GM, Rohr J, Catapano CV,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:16571899

The aureolic acid antibiotic mithramycin (MTM) binds selectively to GC-rich DNA sequences and blocks preferentially binding of proteins, like Sp1 transcription factors, to GC-rich elements in gene promoters. Genetic approaches can be applied to alter the MTM biosynthetic pathway in the producing microorganism and obtain new products with improved pharmacological ... More

Temperature-modulated diversity of TRPV4 channel gating: activation by physical stresses and phorbol ester derivatives through protein kinase C-dependent and -independent pathways.

Authors:Gao X, Wu L, O'Neil RG,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:12738791

The TRPV4 calcium-permeable channel was cloned from mouse kidney M-1 cells, and the effect of temperature modulation on channel gating/activation by physical and chemical signals was evaluated. A TRPV4 cDNA construct with a C-terminal V5 epitope was stably transfected into human embryonic kidney (HEK) 293 and Chinese hamster ovary cells ... More

Endogenous 24(S),25-epoxycholesterol fine-tunes acute control of cellular cholesterol homeostasis.

Authors:Wong J, Quinn CM, Gelissen IC, Brown AJ,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:17981807

Certain oxysterols, when added to cultured cells, are potent regulators of cholesterol homeostasis, decreasing cholesterol synthesis and uptake and increasing cholesterol efflux. However, very little is known about whether or not endogenous oxysterol(s) plays a significant role in cholesterol homeostasis. 24(S),25-Epoxycholesterol (24,25EC) is unique among oxysterols in that it is ... More

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