Transcriptase inverse SuperScript™ IV
Invitrogen™

Transcriptase inverse SuperScript™ IV

La transcriptase inverse (RT) SuperScript™ IV est un mutant exclusif du virus de la leucémie murine de Moloney (M-MLV) avecAfficher plus
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La transcriptase inverse (RT) SuperScript™ IV est un mutant exclusif du virus de la leucémie murine de Moloney (M-MLV) avec une robustesse et une fiabilité élevées dans les réactions de transcription inverse. Elle affiche une résistance aux inhibiteurs, une processivité et une vitesse de réaction sensiblement améliorées par rapport à SuperScript™ III, tout en conservant tous les avantages de l’enzyme précédent, notamment une thermostabilité supérieure, une synthèse d’ADNc très efficace sur toute la longueur et une activité RNase réduite. La RT SuperScript™ IV est conçue pour offrir une synthèse rapide, fiable et homogène de l’ADNc, en présence d’inhibiteurs dans un grand nombre d’échantillons, qui empêchent d’autres RT actuellement disponibles d’agir efficacement.

La RT SuperScript™ IV est le choix idéal pour toutes les applications RT-PCR et qRT-PCR de la gamme de produits SuperScript™. Nous la recommandons tout particulièrement lorsque la reproductibilité et la fiabilité sont des préoccupations majeures et lorsque les inhibiteurs de l’échantillon d’ARN risquent d’interférer avec la synthèse d’ADNc, conduisant à des résultats biaisés dans les études d’expression génétique.

Les caractéristiques de la transcriptase inverse SuperScript™ IV comprennent :
• Meilleure résistance à toute une variété d’inhibiteurs qui peuvent interférer avec la synthèse d’ADNc
• Synthèse d’ADNc spécifique et robuste dans une large gamme de types d’échantillons
• Réaction catalysée par la transcriptase inverse plus rapide, avec une réduction du temps d’incubation qui passe de >50 minutes à 10 minutes
• Processivité bien meilleure par rapport à la RT SuperScript™ III

Source
Purifiée à partir d’E. coli exprimant le gène pol de M-MLV, modifié pour augmenter la thermostabilité et la demi-vie, la processivité, la résistance aux inhibiteurs et pour réduire l’activité RNase H.

Tests de performance et de qualité
Dosages d’endodésoxyribonucléase, d’exodésoxyribonucléase et de ribonucléase ; et rendement et longueur du produit d’ADNc.

Définition de l’unité
Une unité de la RT SuperScript™ IV représente la quantité d’enzymes requise pour incorporer 1 nmole de désoxyribonucléotide dans une substance précipitable à l’acide, en 10 min, à 37°C, en utilisant poly(A) oligo(dT)12-18 comme modèle/amorce.

Conditions de réaction de l’unité
50 mM de Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM de MgCl2, 10 mM de DTT, 50 mM de KCl, 0,5 mM de dTTP, 0,4 Mbq/ml de [3H]-dTTP, 0,4 mM de poly(A) oligo (dT)12-18 et enzyme dans 20 μl pendant 10 min à 37°C.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Type de produit finalADNc premier brin
FormatTube
Nbre de réactions50 réactions
Température de réaction optimale50°C
Quantité10 000 unités
Format de réactionComposants séparés
Type de réactifTranscription inverse
Transcriptase inverseSuperScript IV
Activité de la ribonucléase HRéduction
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Taille (produit final)Jusqu’à 12,3 kb
Matériau de départARN
TechniqueTranscription inverse
Concentration200 U / μl
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réaction10 min
Unit SizeEach
Contenu et stockage

• RT SuperScript IV, 50 μl (200 U/μl)
• Tampon RT 5X, 1 ml
• DTT 0,1 M, 500 μl

Conserver entre –30°C et –5°C.

Foire aux questions (FAQ)

Can I use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase (Cat. No. 28025013, 28025021)? Can other reverse transcriptases, such as SuperScript reverse transcriptase, be used in the same way?

Yes, you can use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase.

We have not tested this for SuperScript reverse transcriptases, so we cannot guarantee it would also work with those products.

This article can be used as a reference for additional information.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Reverse Transcription and RACE Support Center.

In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix. The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.

Can I get comparable cDNA yield and length using the SuperScript IV RT 10-minute protocol as when using the 50-minute protocol for SuperScript III RT?

When compared with SuperScript III RT (and other manufacturers’ RTs) in a synthesis reaction for a 9 kb cDNA, SuperScript IV RT performed successful synthesis in just 10 minutes and did so with comparable (or improved) yield (as shown by gel band density).

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