Pierce™ Monomeric Avidin Agarose

L’agarose avidine monomérique Thermo Scientific Pierce est idéale pour purifier les protéines biotinylées, les peptides et d’autres molécules.

Caractéristiques de l’agarose avidine monomérique :

• Non dénaturante : purifie les produits biotinylés dans des conditions d’élution douces (2 mM de biotine libre)
• Réutilisable : l’agarose avidine monomérique peut être régénérée et réutilisée au moins 10 fois, avec seulement une perte marginale de capacité de liaison de la biotine (diminution d’environ 2,5 % par régénération)
• Spécificité : conserve la spécificité de liaison à la biotine et la faible liaison non spécifique de l’avidine native
• Flexible : liaison d’échantillons dans divers tampons physiologiques et élution soit avec 0,1 M de glycine soit par compétition avec 2 mM de biotine
• Bonne capacité de liaison : supérieure à 1,2 mg résine BSA biotinylée/ml

La protéine d’avidine monomérique immobilisée lie la biotine avec une haute spécificité et une affinité modérée, permettant ainsi d’éliminer les molécules non biotine puis d’éluer de façon compétitive les molécules marquées à la biotine liées à l’aide de 2 mM de biotine dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Cette technique fournit les conditions d’élution les plus douces pour la purification des protéines biotinylées et évite la contamination et d’autres problèmes associés aux méthodes traditionnelles basées sur l’avidine et la streptavidine. La colonne d’avidine monomérique peut alors être régénérée en utilisant 0,1 M de glycine pour dégarnir la colonne de la biotine liée résiduelle sans perdre la capacité de lier un autre échantillon biotinylé.

Avec de l’avidine ou de la streptavidine typique, l’affinité de liaison à la biotine (Kd = 10^-15M) est si grande que la purification avec ces milieux traditionnels nécessite des conditions de dénaturation pour l’élution, telles que 8 M de guanidine·HCl, à pH 1,5 ou l’ébullition dans un tampon de chargement d’échantillons SDS-PAGE réducteur. En plus de leurs effets néfastes sur la protéine biotinylée d’intérêt, ces conditions d’élution sévères amènent en général des protéines étrangères (c.-à-d. les sous-unités avidine ou streptavidine) à se détacher de la résine et à produire une co-élution avec le produit de purification souhaité. En revanche, lorsque l’avidine est couplée à une résine (par exemple billes d’agarose réticulées ou résine UltraLink) comme sous-unité monomère, sa spécificité pour la biotine est préservée mais son affinité de liaison à la biotine diminue jusqu’à un niveau (Kd = 10^-8M) qui favorise une élution ultérieure.

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Résine d’avidine monomérique UltraLink™ Pierce™