Papaïne immobilisée (résine d’agarose)

La papaïne immobilisée Thermo Scientific Pierce est constituée d’une cystéine-endopeptidase (papaïne) immobilisée sur de la résine d’agarose perlé pour permettre la génération et la purification de fragments Fab à partir d’anticorps.

La papaïne est une cystéine-endopeptidase non spécifique isolée du latex de papaye qui est utilisée dans une grande variété d’applications. Lorsque des molécules d’IgG sont incubées avec de la papaïne en présence de cystéine, une ou plusieurs liaisons peptidiques dans la région de la charnière sont divisées, produisant trois fragments de taille similaire : deux fragments Fab et un fragment Fc. Les fragments Fc peuvent être séparés des fragments Fab à l’aide de la protéine A immobilisée ou par chromatographie échangeuse d’ions.

Le fragment Fc de 50 kilodaltons est souvent utilisé pour déterminer la spécificité des récepteurs Fc sans interférence avec la liaison des antigènes. Les fragments Fab sont utiles dans les études immunohistochimiques parce que les fragments pénètrent mieux que les IgG intactes. De plus, la liaison non spécifique des récepteurs Fc est évitée en utilisant uniquement la fraction Fab de l’immunoglobuline.

La papaïne peut également être utilisée pour générer des fragments F(ab’)2. Pour préparer des fragments F(ab’)2, la papaïne est d’abord activée avec 10 mM de cystéine, qui est ensuite éliminée par filtration sur gel. Si aucune cystéine n’est présente pendant la digestion de la papaïne, des fragments F(ab’)2 peuvent être générés. Ces fragments sont souvent incohérents et la reproductibilité est un problème.

La papaïne immobilisée peut être substituée par de la papaïne libre dans n’importe quelle application et est avantageuse, car elle élimine pratiquement l’autolyse, élimine la contamination d’un échantillon avec la protéase et permet de contrôler la digestion en éliminant la papaïne ou en contrôlant le débit d’échantillon sur une colonne de papaïne immobilisée. La papaïne immobilisée est également plus stable contre la dénaturation induite par la chaleur, ce qui entraîne un maintien plus long de l’activité. Le kit de préparation ImmunoPure Fab contient de la papaïne immobilisée, d’autres réactifs nécessaires et un protocole optimisé pour la digestion des anticorps humains, de lapin et de souris.