Immobilized Pepsin (Agarose Resin)

L’agarose de pepsine immobilisée Thermo Scientific Pierce se compose d’une endopeptidase acide (pepsine) immobilisée sur de la résine d’agarose perlé pour permettre la génération et la purification de fragments Fab et F(ab’)2 à partir d’anticorps.

La pepsine est une endopeptidase acide non spécifique produite sous forme de précurseur inactif (pepsinogène) dans la muqueuse de l’estomac des vertébrés. Il y a plusieurs pepsines, chacune ayant un poids moléculaire de 35 000 et un pH optimum de 1 à 3 ; à pH >6, l’enzyme est inactivée en permanence. La pepsine a une grande spécificité de substrat. Elle clive les protéines de préférence à des groupes carboxyliques d’acides aminés aromatiques tels que la phénylalanine, le tryptophane et la tyrosine. Elle ne se clivera pas aux liaisons contenant de la valine, de l’alanine ou de la glycine. Le clivage à d’autres résidus se produit avec une efficacité variable.

La pepsine et d’autres enzymes protéolytiques sont utilisées dans l’analyse en laboratoire de diverses protéines. La pepsine et la papaïne sont souvent utilisées pour générer des fragments d’anticorps. La papaïne est utilisée pour cliver les anticorps en fragments Fab, qui contiennent un seul domaine de liaison d’antigène. La pepsine est utilisée pour générer des fragments F(ab’)2 en éliminant uniquement cette partie du domaine Fc au-delà de la région de la charnière. Les fragments F(ab’)2 qui en résultent sont composés de deux fragments Fab’ liant les anticorps connectés par des disulfures dans la région de la charnière.

La pepsine immobilisée peut être substituée à la pepsine libre dans n’importe quelle application et est avantageuse, car elle élimine pratiquement l’autolyse, élimine la contamination d’un échantillon avec la protéase et permet de contrôler la digestion en éliminant la pepsine. La pepsine immobilisée est également plus stable contre la dénaturation induite par la chaleur, ce qui entraîne un maintien plus long de l’activité. Le kit de préparation F(ab’)2 contient de la pepsine immobilisée, d’autres réactifs nécessaires et un protocole optimisé pour la digestion des anticorps humains, de lapin et de souris.