L’agarose de protéine A Thermo Scientific Pierce est une résine de protéine A et de billes d’agarose de capacité standard destinée à un éventail de méthodes de purification d’anticorps par affinité. Ce produit se compose de cinq colonnes de 5 ml contenant 1 ml de résine.

Caractéristiques de l’agarose Protéine A :

• Protéine A native — la protéine A immobilisée est idéale pour la purification d’IgG polyclonale à partir de sérum humain, de lapin, de porc, de chien ou de chat
• Résine d’agarose — le support est en microbilles d’agarose à 6 % réticulées (CL-6B), la résine la plus populaire pour les méthodes de purification par affinité de protéines
• Inerte et stable— la méthode de fabrication supérieure immobilise la protéine A par des liaisons covalentes résistantes à la lixiviation et exemptes de charges, générant des liaisons non spécifiques faibles et permettant plusieurs utilisations sans baisse de rendement
• Capacité standard — l’agarose avec protéine A Pierce possède une charge normale de protéine A immobilisée, offrant une capacité de liaison de 12 à 19 mg d’IgG/ml humaine par ml de résine (environ 6 à 8 mg d’IgG de souris/ml de résine)

La protéine A-agarose Pierce est composée de protéine A native purifiée ayant été immobilisée de façon covalente sur des billes réticulées d’agarose à 6 % de haute qualité. Les billes d’agarose ont des propriétés physiques et chimiques qui leur permettent d’être utilisées dans une série de méthodes de purification par affinité de type colonne ou lot.

La protéine A est présente dans les parois cellulaires de plusieurs souches de Staphylococcus aureus. Cette protéine de 46,7 kDa est constituée d’une chaîne polypeptidique unique essentiellement dépourvue d’hydrate de carbone. La protéine A native contient quatre sites de liaison à affinité élevée (Ka = 10^8/mol) capables d’interagir avec la région Fc des anticorps de classe IgG chez certaines espèces de mammifères. La fonction de liaison des IgG est optimale lorsque le pH est de 8,2, mais une liaison efficace se produit également dans les tampons neutres et physiologiques (pH 7,0 à 7,6).

La protéine A est une protéine dérivée de bactéries qui se fixe, avec une spécificité et une affinité élevées, au fragment Fc des anticorps, en particulier ceux de la classe IgG. Par rapport à son alternative (protéine G), la protéine A offre la capacité de liaison la plus élevée pour les sous-classes d’IgG de lapins, cochons, chiens et chats. La protéine A a également une capacité de liaison supérieure pour l’IgG humaine, excepté l’IgG3, à laquelle elle se fixe faiblement. La protéine A se fixe également faiblement à l’IgG1 de souris. Elle n’est pas recommandée dans la plupart des applications avec cet isotype d’anticorps.

L’agarose Pierce Protéine A est préparée à l’aide de compositions chimiques de couplage Thermo Scientific AminoLink, qui offrent plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles d’immobilisation de ligands. L’immobilisation par AminoLink génère une combinaison entre les monomères de sucre des microbilles d’agarose et les résidus de lysine native sur la protéine A par de simples liaisons d’amides. Contrairement à l’immobilisation typique par bromure de cyanogène (CNBr), la méthode AminoLink n’introduit aucun nouveau groupe chimique qui pourrait causer une liaison non spécifique non désirée et produit une liaison stable, essentiellement irréversible. Résultat : une résine à haute capacité de liaison, qui conserve la protéine A immobilisée fonctionnelle sur plusieurs séries de purification d’anticorps.

Propriétés de l’agarose en microbilles réticulées à 6 % (CL-6B) :
• Stabilité du pH : 2 à 14 (court terme) ; 3 à 13 (long terme)
• Dimension moyenne des particules : 45 à 165 microns
• Limite d’exclusion : 10 000 à 4 000 000 daltons
• Débit volumétrique maximal : environ 1 ml/minute (pour une colonne de 1 cm de diamètre)
• Vitesse linéaire maximale : 30 cm/heure
• Pression maximale : moins de 25 psi (1,5 bar), définie comme la chute de pression maximale dans une colonne que la résine peut supporter (remarque : Il est possible que la pression manométrique indiquée sur un appareil de chromatographie en phase liquide mesure la pression totale du système plutôt que la chute de pression dans la colonne.)

Produits associés
Colonnes de protéine A Agarose Pierce™
Kit de purification d’IgG-protéine A Pierce™, 1 ml