Ces kits de centrifugation pour protéine A/G Thermo Scientific NAb sont pratiques pour procéder rapidement et à petite échelle à la purification par affinité d’anticorps provenant de divers types d’échantillons. Chaque kit comprend assez de colonnes de centrifugation pour protéine A/G NAb, de tubes de prélèvement, de tampons et un protocole rationalisé pour purifier au moins 2 échantillons d’anticorps.

Caractéristiques de l’agarose de protéine A/G Pierce :

• Protéine A/G – la protéine de fusion recombinante immobilisée des domaines de liaison aux anticorps de la protéine A et de la protéine G permet la purification d’IgG polyclonal à partir de presque n’importe quelle espèce mammifère
• Résine d’agarose – le support est constitué d’agarose en billes réticulée à 6 % (CL-6B), la plus populaire des résines pour les méthodes de purification par affinité des protéines
• Inerte et stable – la méthode de fabrication supérieure immobilise la protéine G par des liaisons covalentes résistantes à la lixiviation et exemptes de charges, générant des liaisons non spécifiques faibles et permettant plusieurs utilisations sans baisse de rendement
• Capacité standard – l’agarose avec protéine A/G Pierce possède une charge normale de protéine A/G immobilisée, offrant une capacité de liaison supérieure à celle de la résine à 7 mg d’IgG humaine par ml

L’agarose Pierce Protéine A/G est composé de protéines de fusion recombinante de protéines A/G ayant été immobilisées par liaison covalente sur des microbilles d’agarose à 6 % réticulées de haute qualité (CL-6B). Cette variété particulière de résine fournit la combinaison la plus polyvalente des caractéristiques chromatographiques et permet une purification à haut rendement et de haute pureté pour les IgG entières provenant d’échantillons de sérum de mammifères. Les propriétés physiques et chimiques des billes d’agarose conviennent à de nombreux systèmes de purification par affinité.

La protéine A/G est une protéine issue du génie génétique qui combine à la fois les domaines de liaison des IgG des protéines A et des protéines G. La protéine de fusion est exprimée en E.Coli. La protéine A/G contient quatre domaines de liaison au Fc de la protéine A et deux de la protéine G, donnant lieu à une masse finale de 50 460 daltons (de 40 à 45 kDa par SDS-PAGE). La protéine A/G n’est pas aussi dépendante du pH que la protéine A seule mais possède par ailleurs les propriétés additives de la protéine A et de la protéine G.

La protéine A/G se lie à toutes les sous-classes d’IgG humaine, ce qui en fait le choix idéal pour la purification d’anticorps IgG polyclonaux ou monoclonaux dont les identités de sous-classes n’ont pas encore été déterminées. En outre, elle se lie aux IgA, IgE, IgM et (dans une moindre mesure) aux IgD. La protéine A/G se lie également bien à toutes les sous-classes d’IgG de souris mais ne se lie pas aux IgA, IgM ou sérum-albumine de souris. Ceci fait de la protéine A/G un excellent outil pour la purification et la détection des anticorps monoclonaux de souris provenant de sous-classes d’IgG, sans aucune interférence des IgA, IgM et sérum-albumine murine. Les sous-classes individuelles d’anticorps monoclonaux de souris sont susceptible de présenter une affinité plus forte à la protéine A/G chimérique qu’à la protéine A ou à la protéine G seules.

L’agarose Pierce Protéine A/G est préparé à l’aide du dispositif de chimie de couplage Thermo Scientific AminoLink, offrant plusieurs avantages comparé aux méthodes d’immobilisation de ligand. L’immobilisation par AminoLink génère une combinaison entre les monomères de sucre des microbilles d’agarose et les résidus de lysine native sur la protéine A par de simples liaisons d’amides. Contrairement à l’immobilisation typique par bromure de cyanogène (CNBr), la méthode AminoLink n’introduit aucun nouveau groupe chimique qui pourrait causer une liaison non spécifique non désirée et produit une liaison stable, essentiellement irréversible. Ceci donne une résine à forte capacité de liaison pouvant retenir la protéine A/G immobilisée fonctionnelle pendant plusieurs cycles de purification des anticorps.

L’agarose Pierce Protéine A/G permet de lier pratiquement tous les IgG isotypes et de toutes les espèces de mammifères issus de sérum, d’un liquide d’ascite, de surnageant de culture cellulaire et d’autres échantillons d’anticorps, permettant ainsi une purification efficace des anticorps. Étant donné que la protéine A/G combine à la fois les domaines de liaison des immunoglobulines de la protéine A et de la protéine G, la résine est efficace pour la purification par affinité des anticorps IgG provenant d’une large gamme d’espèces mammifères hôtes.

Propriétés de l’agarose en microbilles réticulées à 6 % (CL-6B) :
• Stabilité du pH : 2 à 14 (court terme) ; 3 à 13 (long terme)
• Dimension moyenne des particules : 45 à 165 microns
• Limite d’exclusion : 10 000 à 4 000 000 daltons
• Débit volumétrique maximal : environ 1 ml/minute (pour une colonne de 1 cm de diamètre)
• Vitesse linéaire maximale : 30 cm/heure
• Pression maximale : moins de 25 psi (1,5 bar), définie comme la chute de pression maximale dans une colonne que la résine peut supporter (remarque : La pression manométrique indiquée d’un appareil de chromatographie en phase liquide peut mesurer la pression totale du système plutôt que la chute de pression dans la colonne.)

Autres données sur le produit
• Purification d’anticorps à l’aide de protéines de liaison d’anticorps

Produits connexes
Agarose avec protéine A/G Pierce™
Colonnes de centrifugation avec protéine A/G NAb™, 1 ml